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抗生素检定培养基6号

英文名称:

货 号 :022178

规 格 :100g

用途:抗生素检定培养基6号

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添加日期:2014-02-25

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  022178 抗生素检定培养基6号

  (Antibiotic Agar No.6)

  用 途:

  抗生素检定培养基6号用于黏菌素等效价及残留的微生物学检定(中华人民共和国药典2010版)。

  原 理:

  本法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用,抑菌圈直径与抗生素的浓度或活性有关;比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小,以测定供试品效价的一种微生物学方法。

  配方(每升):

  胨 8g

  牛肉浸出粉 3g

  氯化钠 45g

  磷酸氢二钾 3.3g

  葡萄糖 2.5g

  酵母浸出粉 5g

  磷酸二氢钾 1g

  琼脂 15g

  最终pH 7.3±0.1

  使用方法(计数用法):

  1、称取抗生素检定培养基6号82.8g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,115℃高压灭菌30min。

  2、双碟的制备应在无菌室或洁净室内进行,并注意避免微生物及抗生素污染。培养基应在水浴中或微波炉内融化,避免直火加热。

  3、双碟的底层:用灭菌大口20mL吸管或其它灭菌分装器,吸取已融化的培养基20mL注入双碟内,待凝固后加入菌层。(双碟内的培养基应均匀的分布于平皿内。)

  4、菌层:取出试验用菌悬液,按预试好的加菌量[能得清晰的抑菌圈位度。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18~22mm,三剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15~18mm],用灭菌吸管吸取菌悬液适量,加入已融化并保温在水浴中(水浴温度:细菌为48~50℃,芽孢可至60℃)的培养基内,摇匀,作为菌层培养基使用。取出加有底层培养基的双碟,用灭菌大口5mL、10mL吸管或其他适宜分装器,吸取菌层培养基5mL,加于底层培养基上,使其均匀摊布,等凝固后放置钢管。

  5、放置钢管:使用钢管放置器或小眼科镊子,使钢管平稳的落在培养基上,相应剂量的钢管 对角均匀放置。钢管放妥后,双碟静置5~10分钟后,再开始滴加抗生素溶液。

  6、滴加抗生素溶液用灭菌毛细滴管或微量加样器(调节加样量约为200-300μL),在滴加之前用溶液洗2~3次。滴加标准品及供试品溶液顺序,因实验设计方法不同而异。(2.2)法,在双碟的4个钢管中分别成“Z”字形滴加标准品及供试品高、低两种浓度的溶液;在(3.3)法的6个钢管中间隔3个钢管中分别滴加标准品及供试品高、中、低3种浓度,并使相同浓度成对角。滴加溶液至钢管口平满。注意滴加时间溶液的间隔不可过长。

  7、滴加完毕,用陶瓦盖覆盖双碟,平稳置于双碟托盘内,将双碟托盘水平平稳地移入培养箱中间位置,在35~37℃或该药品标准规定的温度下培养至所需时间。

  8、抑菌圈测量:测量前应检查抑菌圈是否圆整,如有破圈或圈不圆整,应舍弃该碟。可用抑菌圈测量仪或游标卡尺测量。

  质量控制:

  本品在灭菌后应澄清无沉淀,下列菌株接种后35~37℃培养16~18h生长情况如下表:

  贮 存:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

  规 格:100g

  参考文献:

 

  1. 《中华人民共和国药典》2010年版,附录XI A 抗生素微生物鉴定法。