商品化脱水合成培养基配制使用注意事项
发布时间：2019-10-18 浏览次数：4638
1. 一般要求
正确制备培养基是微生物检验的最基础步骤之一，使用脱水培养基和其他成分，尤其是含有有毒物质（如胆盐或其他选择剂）的成分时，应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题，如含琼脂培养基不凝固、ph不在要求范围、灭菌后颜色变深等。
使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制。如重量（体积）、pH、制备日期、灭菌条件和操作步骤等。 实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息，如：培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积（分装体积）、无菌措施（包括实施的方式、温度及时间）、配置日期、人员等，以便溯源。
2. 水
实验用水的电导率在25℃时不应超过25 μS/cm(相当于电阻率≥0.4 ΜΩcm)，除非另有规定要求。 水的微生物污染不应超过103 CFU/mL。应按GB 4789.2，采用平板计数琼脂培养基，在36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h进行定期检查微生物污染。
3.培养基称重和溶解
小心称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末），先加入适量的水，充分混合（注意避免培养基结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其快速分散，必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟。
4. 培养基pH 的测定和调整
用pH计测pH，必要时在灭菌前进行调整，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至25 ℃时，pH应在标准pH±0.2范围内。一般使用浓度约为40 g/L（约1 mol/L）的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5 g/L（约1 mol/L）的盐酸溶液调整培养基的pH。如需灭菌后进行调整，则使用灭菌或除菌的溶液。
5. 培养基分装
将配好的培养基分装到适当的容器中，容器的体积应比培养基体积最少大20%。
6. 培养基灭菌
培养基应采用湿热灭菌法或过滤除菌法。某些培养基不能或不需要高压灭菌，可采用煮沸灭菌，如SC肉汤等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质，煮沸后应迅速冷却，避光保存；有些试剂则不需灭菌，可直接使用。
湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行，高压灭菌一般采用121℃±3℃灭菌15min，具体培养基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。培养基体积不应超过1000mL，否则灭菌时可能会造成过度加热。所有的操作应按照标准或使用说明的规定进行。灭菌效果的控制是关键问题。加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。这对于大容量和敏感培养基十分重要，例如含有煌绿的培养基。培养基十分重要，例如含有煌绿的培养基。
过滤除菌可在真空或加压的条件下进行。使用孔径为0.2 μm的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的 各个部分或使用预先消毒的设备。一些滤膜上附着有蛋白质或其他物质（如抗生素），为了达到有效过滤，应事先将滤膜用无菌水润湿。
检查 对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行检查，尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进行检查。
7. 培养基的使用
7.1 琼脂培养基的融化
将琼脂培养基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高压锅中的层流蒸汽）使之融化。经过高压的琼脂培养基应尽量减少重新加热时间，融化后避免过度加热。融化后应短暂置于室温中（如2 min）以避免玻璃瓶破碎。
融化后的培养基放入47℃～50℃的恒温水浴锅中冷却保温(可根据实际培养基凝固温度适当提高水浴锅温度)，直至使用，培养基达到47℃～50℃的时间与培养基的品种、体积、数量有关。融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4 h。未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培养基尤应注意，融化后保温时间应尽量缩短，如有特定要求可参考指定的标准。倾注到样品中的琼脂培养基温度应控制在约45℃左右。
7.2 培养基的脱氧
必要时，将培养基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加热15 min；加热时松开容器的盖子；加热后盖紧，并迅速冷却至使用温度（如FT培养基）。
7.3 添加成分的加入
对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃～50℃时再加入。无菌的添加成分在加入前应先放置到室温，避免冷的液体造成琼脂凝结或形成片状物。将加入添加成分的培养基缓慢充分混匀，尽快分装到待用的容器中。
7.4 平板的制备和储存
倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少为3 mm（直径90mm的平皿，通常要加入18mL～20mL琼脂培养基）。将平皿盖好皿盖后放到水平平面使琼脂冷却凝固。如果平板需储存，或者培养时间超过48h或培养温度高于40℃，则需要倾注更多的培养基。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中，以防止培养基成分的改变。在平板底部或侧边做好标记，标记的内容包括名称、制备日期和（或）有效期。也可使用适宜的培养基编码系统进行标记。
将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长储存期限。为了避免冷凝水的产生，平板应冷却后再装入袋中。储存前不要对培养基表面进行干燥处理。对于采用表面接种形式培养的固体培养基，应先对琼脂表面进行干燥：揭开平皿盖，将平板倒扣于烘箱或培养箱中（温度设为25℃～50℃）；或放在有对流的无菌净化台中，直到培养基表面的水滴消失为止。注意不要过度干燥。商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。
8. 培养基的弃置
所有污染和未使用的培养基的弃置应采用安全的方式，并且要符合相关法律法规的规定。
