细胞实验注意事项及配制基础培养基操作步骤
发布时间：2023-10-25 浏览次数：475
以下是平台里的科研小姐姐在做细胞实验时积累的一些经验和心得，分享给大家，目的是为了让实验新手小白能够快速上手养细胞。
细胞实验全程注意事项
1. 无菌操作是重中之重！！！细胞培养对无菌条件比较苛刻，实验人在进行整个细胞实验的无菌意识一定要强，否则一个不小心，发生细菌污染，轻则浪费细胞，重则污染整个培养箱。
2. 实验人员进入细胞房前应该换上干净的鞋子、白大褂、手套和口罩。
3. 所有耗材放入工作台前都需用75%酒精进行消毒，双手进入工作台前也需要用75%的酒精进行消毒。
4. 进行实验前应先对工作台进行紫外灭菌30min以上，并将所有需要用到的耗材放到工作台上一起进行紫外灭菌（简称照台）。
5. 使用酒精灯的实验室需要特别注意安全，刚喷洒完酒精的物品不要靠近酒精灯，有生物安全柜的实验室则不需要使用酒精灯。
6. 进行实验前应先用酒精棉擦拭工作台，所有操作都应在靠近酒精灯火焰下方进行（有生物安全柜的则不需要使用酒精灯）。
7. 实验结束后应及时将垃圾处理，再用酒精棉擦拭工作台，对工作台进行紫外灭菌30min以上。
配制基础培养基
以下配制的是基础培养基，主要用于普通细胞的增殖培养，如小鼠RAW264.7巨噬细胞，内含2%的双抗和10%的胎牛血清。个别特殊细胞需要配制特殊的培养基进行培养。
01 准备材料：50mL离心管、封口膜、镊子、移液枪、DMEM培养液、双抗、胎牛血清等。
02 操作步骤：
1. 用移液枪吸取44mL的DMEM培养液，转移至离心管中。注意枪头不要碰到培养液瓶口。
2. 用移液枪吸取1mL的双抗，转移至离心管中，吹打混匀。
3. 用移液枪吸取5mL的胎牛血清，转移至离心管中，吹打混匀。
4. 用封口膜将离心管封口，置于4℃保存。
5. 双抗、胎牛血清置于-20℃长期保存，置于4℃短期保存。
6. DMEM培养液置于4℃保存。
03 注意事项：
1. 配制好的培养基尽快使用，一般可存放三个月左右，放置久了里面的物质可能会失活，培养出来的细胞状态就不这么好了。
2. 使用移液枪时，注意枪头不要碰到任何东西，如果碰到了，不要犹豫马上丢弃。
3. 双抗、胎牛血清应避免反复冻融，可根据需要将其分装保存。
文章来源：“金信科研”公众号，作者~
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