RAW 264.7细胞培养，小鼠单核巨噬细胞白血病细胞培养攻略
发布时间：2023-11-08 浏览次数：516
RAW 264.7，小鼠单核巨噬细胞白血病细胞，来源于雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤，是常用的炎症细胞模型之一，常见于研究细胞吞噬、细胞免疫、分子免疫学。
RAW264.7 属单核细胞/巨噬细胞系，具有松散贴壁的短梭形细胞和圆形活细胞。细胞常用DMEM培养基，含10%优质胎牛血清，一般2-3天传代一次，推荐传代比例1:3-1:4，但RAW264.7在培养过程中容易出现细胞形态改变（长出伪足）、消化困难、生长缓慢等问题，需要我们特别注意以下几点：
1. RAW 264.7 因其具有较强的吞噬能力，吞噬后释放的趋化因子可促使细胞分化出伪足，粘附攀爬能力增强。若细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣，会促使细胞形态改变成多角形且面积增大，时常有较长的黑色触角，导致细胞消化困难，因此要尽量避免细胞发生形态改变。即在接种细胞时保持一个适中的传代密度，避免其向终末细胞分化。
2. RAW264.7喜欢连片生长，低密度下一片一片分布在培养皿中且不相连接，高密度下才会连成大片且可能叠加成层，导致部分细胞漂浮无法贴壁，因此，培养时要密切关注细胞汇合度，控制细胞生长速度，不可等到叠加成层才传代。
3. RAW264.7传代后贴壁较短，约半小时即可贴壁，细胞呈圆形，折光度很好，生长一段时间后，部分细胞会变成类似四角形，伸出伪足之类。此时必须传代，无论汇合度如何都需要进行传代，避免细胞形态进一步发生改变。
4. RAW264.7不能用胰酶消化，推荐吹打传代。分化的细胞贴壁牢固，传代的时候千万不要强制性吹下这些细胞，只接种容易吹下的那些未分化细胞；吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打；推荐使用巴氏管吹打；亦可在液体环境下用细胞刮刀将细胞刮下来。
5. 细胞培养时无法保证100% 不分化，但通过传代可以更好地控制细胞分化率。
6. RAW264.7在不同生长密度下细胞形态不同，若复苏密度太高，细胞增殖过快，会加剧细胞的营养缺失，加速细胞老化；若复苏密度太低，细胞生长缓慢，推荐采用直径6cm的培养皿复苏细胞，细胞数量控制在1.0×10^6~1.5×10^6个。
7. 细胞刚接种有少量短触角，属于正常现象，如果出现胞体变大，突触伸长可以已经发生了分化。对于轻微分化细胞，可以轻吹起部分细胞，更换培养环境后进行调整。
RAW 264.7培养注意事项：
1. RAW 264.7 容易发生形态变化，在接种细胞时务必保持适中的传代密度，避免其向终末细胞分化；
2. RAW264.7喜欢连片生长，在不同生长密度下细胞形态不同，高密度下细胞容易漂浮，因此密切关注细胞汇合度，及时传代；
3. RAW264.7不能用胰酶消化，推荐吹打传代，亦可在液体环境下用细胞刮刀将细胞刮下来；
4. 细胞刚接种有少量短触角，属于正常现象，如果出现胞体变大，突触伸长可能已经发生了分化。对于轻微分化细胞，可以轻吹起部分细胞，更换培养环境后进行调整，或者尽快传代，避免形态进一步改变。
文章来源：“丰晖生物”公众号，作者~。
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