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肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR检测试剂盒

英文名称:PCR Detection Kit for BotulinumNeurotoxin Genes Type E/F

货 号 :KJD07P

规 格 :24测试/盒

用途:用于食品中肉毒梭菌E/F型毒素基因的检测

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肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR检测试剂盒

【产品简介】

本试剂盒基于PCR技术,并适用于食品中肉毒梭菌E/F型毒素基因的检测。

【检测原理】

利用2对特异性引物和PCR反应所需其他试剂,如反应缓冲液、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等,加入待检DNA模板样品,即可进行PCR扩增反应。经比对扩增产物目标条带即可判定E/F型肉毒梭菌毒素基因。

【产品特点】

1. 快速简便:将酶、引物等反应组分混匀后进行干粉化处理,增加试剂稳定性,使用时减少溶液配制步骤,更为便捷,整个检测反应可在3 h内完成;

2. 特异性高:按照GB 4789.12−2016《食品微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验》提供的目标基因引物,保证扩增反应的高度特异性;

3. 判读简单:扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和紫外仪观察目标条带即可判别,直观方便。

【产品组分】

编号

组分名称

规格×数量

--

冻干试剂(bont E/F)

8管×3排

--

复溶液

1 mL×1管

Y07

阳性对照

1管(冻干型)

--

阴性对照

1管(冻干型)

--

裂解液

1 mL×1管

--

超纯水

1 mL×1管

--

6×Loading buffer

240 μL×1管

 

说明书

1份

【储存条件与保质期】

2~8℃条件下储存,有效期为12个月。

【所需其他材料和适用仪器】

1. PCR仪器、高速离心机、电泳仪、水平电泳槽、紫外仪、移液器、移液枪头及离心管等;

2. 琼脂糖、溴化乙锭(EB)或其他核酸染料。

【使用指南】

1. 样品前处理

1) 参照GB 4789.12−2016,挑取可疑菌落或待鉴定菌株接种TPGY,35℃±1℃厌氧培养24 h。吸取TPGY培养液1 mL至无菌离心管中,12000 r/min离心2 min,弃上清,加入30 μL裂解液,充分悬浮,转移至0.2 mL无菌离心管中,轻弹管壁消除气泡,99℃加热10 min;

2) 12000 r/min离心15 min,上清即为粗提的DNA,可转移至0.2 mL无菌离心管中,在-20℃下可长期保存。

2. 加样、反应

1) 首次使用时,分别加入80 μL超纯水至阳性对照和阴性对照管中,充分溶解,-20℃存储待用;

2) 取出干粉试剂,按照需求分别剪取n个检测试剂管(n=待检测样品数+1管阳性对照+1管阴性对照),每管加入18 μL复溶液,充分溶解后待用;

3) 向上述已加入复溶液的n个反应管中分别加入待测样品核酸、阴性对照、阳性对照各2 μL,紧盖后置于PCR仪中按设定的反应程序进行扩增反应;

4) PCR反应程序如下:

3. 结果判读

反应后每管中加入4 μL6×Loading buffer,混匀,并取8 μL经1.5%琼脂糖凝胶电泳,在紫外仪下观察,阴性对照无条带扩增,阳性对照中出现目标条带(参照图1),PCR试验结果成立。根据每个样品对应的反应产生的目标条带,即可判断肉毒梭菌毒素基因类型。若阴阳性对照管反应结果不符,则本次检测结果无效,应重新检测或与产品技术支持联系。