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HKE379-01A NLS-Cas9-EGFP Nuclease(核酸酶)

英文名称:NLS-Cas9-EGFP Nuclease

货 号 :HKE379-01A

规 格 :50μg/盒

用途:核酸酶

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产品名称:NLS-Cas9-EGFP Nuclease
中文名称:NLS-Cas9-EGFP 核酸酶

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKE379-01ANLS-Cas9-EGFP Nuclease50μg/盒crispr基因编辑(核酸酶)1575

产品描述:
      CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。Cas9 核酸酶是一种 RNA 引导的内切酶,能催化双链 DNA 的断裂,这种靶向核酸酶是高精度基因组编辑的有力工具。本制品在蛋白两端分别加了核定位信号(NLS),在 C 端加了 EGFP 序列。
      Cas9 蛋白与 Crispr/Cas9 系统的导向 RNA(sgRNA)组成一个高度稳定的核糖核蛋白(RNP)复合物。当 Cas9 带有 NLS 表达序列时,Cas9-RNP 复合体可以在进入细胞后立即定位到细胞核,无需体内转录或翻译。此外,与其他系统相比,Cas9-RNP 复合物从细胞中迅速清除,最大限度地减少了脱靶效应。EGFP 通过荧光激活细胞排序(FACS),使细胞群富集以进行所需的基因组编辑,显著降低了在基因组编辑应用中单细胞克隆和基因分型的人工和成本。

产品特点:纯蛋白体系,避免 CRISPR 基因敲除时引入质粒或病毒干扰;蛋白带有 EGFP 标记,更易进行转染效率判断和细胞富集;可显著降低脱靶效应。

产品用途:
      1,基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲除;
      2,基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲入;
      3,sgRNA 剪切靶点 DNA 效率检测,降低体内筛选成本;
      4,体外剪切靶 DNA 的特异位点。

应用实例:图例)Cas9 Nuclease 做 DNA 片段切割活性检测:
带有靶位点的 DNA 片段为 1500bp,酶切后的片段为 1100bp 和 400bp。

Cas9 Nuclease 做 DNA 片段切割活性检测

保存温度:-20℃保存,或-80℃长期保存。

NLS-Cas9-EGFP Nuclease 产品包装(A包装):

产品组成体积
NLS-Cas9-EGFP Nuclease(1μg/μl)50 μL
10× Cas9 Reaction Buffer500μl
*HKE379-02 系列为 5μg/μl 浓度,共 10μl

质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清 晰单一的目的条带,纯度达 95%,内毒素含量<100EU/mg,qPCR 方法检测无大肠杆菌基因组残 留,无 RNase、核酸内、外切酶污染。

体外切割体系(20μL):

dsDNA200 ng
sgRNA200 ng
NLS-Cas9-EGFP Nuclease0.5-1.5 ug
10× Cas9 Reaction Buffer2 μl
RNase Free WaterTo 20 μl

37 ℃保温 1 h、70℃保温 10 min 
注:在反应体系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl,防止RNase 污染。

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* 为 Cas9(D10A) Nickase,能在与 sgRNA 靶序列互补的 DNA 链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,可以减少意外的脱靶基因修饰。
** 为 Cas9(H840A) Nickase,能在 sgRNA 靶序列所在的DNA 链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,可以减少意外的脱靶基因修饰。
***为 Cas9(D10A,H840A) Nuclease,具有靶 DNA 结合 活性, 但无切割活性,可用于阴性对照等用途。