产品名称：NGS Fast Ligation Module
中文名称：NGS 快速连接模块
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKM066A | NGS Fast Ligation Module | 24次/盒 | 预混酶模块（NGS 快速连接） | 2745 |
产品描述：
NGS Fast Ligation module 是专门针对于 illumina 高通量测序平台所优化的预混酶模块。使用本模块可以将 3'端 带有 dA 尾的 DNA 片段与 adapter 进行快速连接。与常规方法比较，本模块采用了一步法反应流程，NGS DNA Fragmentation/End Repair/dA-Tailing Module 或 NGS DNA End Repair/dA-Tailing Module 反应后所获得的片段后 DNA，无需磁珠纯化，可使用本模块直接与 adapter 进行连接，省去了多步磁珠纯化步骤，操作更加简便，文库转 化效率更高。
适用范围：将 DNA adapter 与 3'端添加 dA 的 DNA 文库片段的快速连接（如 NGS DNA Fragmentation Module 和 EndRepair/dA-tailing Module 处理后的产物）。
适用样本量：1ng -1µg DNA。
产品特点：
1) 无需磁珠纯化，可直接将 DNA adapter 与带有 dA-Tailing 的 DNA 片段连接；
2) 连接效率高，可进行微量样本的 DNA adapter 连接。
注意事项：
1、开始实验前，对 DNA 浓度精确定量至关重要，推荐 DNA 上样量为 1ng-1µg。DNA可溶解于去离子水、10 mM Tris Buffer EB 或 0.1×TE 等。
2、推荐 DNA 的上样量指的是片段化后的 dsDNA 的量。推荐 使用 Qubit、Picogreen 或者其他染料法对 DNA 浓度进行精确定 量。
3、请确认 DNA 溶液中不含阳离子及螯合剂，如果 DNA 溶解 于 1×TE 或不确定 DNA 溶液中的 EDTA 浓度，需先对 DNA 进行纯化后再进行片段化反应。
保存条件：-20℃保存，尽量避免反复冻融。
NGS Fast Ligation Module 产品组成：
| A 包装(24 次) | B 包装(96 次) | |
| Adapter-ligation Enzyme | 120μl | 480μl |
| Adapter-ligation Buffer | 1ml×2 | 1ml×5 |
| RNase Free Water | 1ml | 1ml×2 |
操作步骤：
1，根据经 NGS DNA Fragmentation Module 和 End Repair/dA-Tailing Module 处理后的产物的量，计算使用接头 的量并按照下表对接头浓度进行稀释：
| 起始样本量 Adapter | 稀释倍数 | 稀释后 Adapter |
| 100ng＜X≤1μg | 不稀释 | 10μM |
| 25ng＜X≤100ng | 稀释 2 倍 | 5μM |
| 5ng＜X≤25ng | 稀释 10 倍 | 1μM |
| 1ng＜X≤5ng | 稀释 25 倍 | 0.4μM |
2，按照下表所示各组分用量配制反应体系，并将配制完成的反应体系轻柔混匀后置于冰上
| 名称 | 体积 |
| dA-tailed DNA | 40μl |
| Adapter -Ligation Buffer | 50μl* |
| Adapter -Ligation Enzyme | 5μl |
| DNA Adapter | 5μl** |
| Total volume | 100μl |
注：* Adapter -Ligation Buffer 长时间放置会有白色沉淀，用前请上下颠倒、振荡，使液体中白色沉淀充分溶 解并瞬时离心后使用。
**本公司接头浓度为 10μM，请根据片段化 dsDNA 量对接头进行稀释，加水补齐，使接头体积为 5μl。
3，将此配制好的 100µl连接反应液轻柔吸打混匀，置于 PCR 仪中，反应程序如下：
| 温度 | 时间 |
| 热盖 105℃ | off |
| 16℃ | 15min |
| 4℃ | Hold |
注：当片段化 dsDNA 量较低，实验效果不理想时，可尝试将连接时间延长一倍。
4，连接产物磁珠纯化（Post Ligation Clean Up） 该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连 接的 Adapter 或 Adapter Dimer 等无效产物。
