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NGS Fast Ligation Module(NGS 快速连接模块)

英文名称:NGS Fast Ligation Module

货 号 :HKM066A

规 格 :24次/盒

用途:将 DNA adapter 与 3'端添加 dA 的 DNA 文库片段的快速连接…

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产品名称:NGS Fast Ligation Module
中文名称:NGS 快速连接模块

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKM066ANGS Fast Ligation Module24次/盒预混酶模块(NGS 快速连接)2745

产品描述:

      NGS Fast Ligation module 是专门针对于 illumina 高通量测序平台所优化的预混酶模块。使用本模块可以将 3'端 带有 dA 尾的 DNA 片段与 adapter 进行快速连接。与常规方法比较,本模块采用了一步法反应流程,NGS DNA Fragmentation/End Repair/dA-Tailing Module 或 NGS DNA End Repair/dA-Tailing Module 反应后所获得的片段后 DNA,无需磁珠纯化,可使用本模块直接与 adapter 进行连接,省去了多步磁珠纯化步骤,操作更加简便,文库转 化效率更高。
      适用范围:将 DNA adapter 与 3'端添加 dA 的 DNA 文库片段的快速连接(如 NGS DNA Fragmentation Module 和 EndRepair/dA-tailing Module 处理后的产物)。
      适用样本量:1ng -1µg DNA。

产品特点:
      1) 无需磁珠纯化,可直接将 DNA adapter 与带有 dA-Tailing 的 DNA 片段连接;
      2) 连接效率高,可进行微量样本的 DNA adapter 连接。

注意事项:
      1、开始实验前,对 DNA 浓度精确定量至关重要,推荐 DNA 上样量为 1ng-1µg。DNA可溶解于去离子水、10 mM Tris Buffer EB 或 0.1×TE 等。
      2、推荐 DNA 的上样量指的是片段化后的 dsDNA 的量。推荐 使用 Qubit、Picogreen 或者其他染料法对 DNA 浓度进行精确定 量。
      3、请确认 DNA 溶液中不含阳离子及螯合剂,如果 DNA 溶解 于 1×TE 或不确定 DNA 溶液中的 EDTA 浓度,需先对 DNA 进行纯化后再进行片段化反应。

保存条件:-20℃保存,尽量避免反复冻融。

NGS Fast Ligation Module 产品组成:

 A 包装(24 次)B 包装(96 次)
Adapter-ligation Enzyme120μl480μl
Adapter-ligation Buffer1ml×21ml×5
RNase Free Water1ml1ml×2

操作步骤:

1,根据经 NGS DNA Fragmentation Module 和 End Repair/dA-Tailing Module 处理后的产物的量,计算使用接头 的量并按照下表对接头浓度进行稀释:

起始样本量 Adapter稀释倍数稀释后 Adapter
100ng<X≤1μg不稀释10μM
25ng<X≤100ng稀释 2 倍5μM
5ng<X≤25ng稀释 10 倍1μM
1ng<X≤5ng稀释 25 倍0.4μM

2,按照下表所示各组分用量配制反应体系,并将配制完成的反应体系轻柔混匀后置于冰上

名称体积
dA-tailed DNA40μl
Adapter -Ligation Buffer50μl*
Adapter -Ligation Enzyme5μl
DNA Adapter5μl**
Total volume100μl

注:* Adapter -Ligation Buffer 长时间放置会有白色沉淀,用前请上下颠倒、振荡,使液体中白色沉淀充分溶 解并瞬时离心后使用。 
      **本公司接头浓度为 10μM,请根据片段化 dsDNA 量对接头进行稀释,加水补齐,使接头体积为 5μl。

3,将此配制好的 100µl连接反应液轻柔吸打混匀,置于 PCR 仪中,反应程序如下:

温度时间
热盖 105℃off
16℃15min
4℃Hold

注:当片段化 dsDNA 量较低,实验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。

4,连接产物磁珠纯化(Post Ligation Clean Up) 该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连 接的 Adapter 或 Adapter Dimer 等无效产物。

连接产物磁珠纯化(Post Ligation Clean Up)