产品名称:阪崎克罗诺杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
英文名称:PCR Detection Kit for Cronobacter sakazakii (Fluorescent Probe Assays)
产品编号与包装规格:
编号 | 规格 |
FZ010BF2 | 48 测试/盒 |
产品简介:本试剂盒适用于食品中阪崎克罗诺杆菌的检测。
检测原理:基于 Real Time PCR 技术,利用针对于阪崎克罗诺杆菌特异性基因的引物、荧光探针以及其他反应所需试剂,加入待检样品即可进行扩增反应。在发生扩增过程中,荧光探针与目的基因片段结合,可被 Taq 酶分解并产生荧光信号,此时荧光定量 PCR 仪可识别该荧光信号,同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线,进而判定阪崎克罗诺杆菌是否检出。
阪崎克罗诺杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分:
储存条件与保质期:-20℃避光储存,有效期为12个月,避免反复冻融。
灵敏度:最低检验限达到100 CFU/Test
所需其他材料和适用仪器:荧光定量 PCR 仪(具有能够检测 FAM 标记的荧光通道)、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
阪崎克罗诺杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用指南:
1,样品前处理
1) 样品增菌液模板 DNA 的制备:
a) 样品增菌:参照 GB 4789.40-2016《食品微生物学检验克罗诺杆菌属检验》,取样品 100 g(mL),加入到盛有 900 mL 缓冲蛋白胨水(BPW)的无菌容器中均质,36±1℃培养 18-24 h;
b) 吸增菌液1 mL到1.5 mL规格的无菌离心管中,6000 r/min 离心 5 min,弃上清,用 50 μL 无菌超纯水悬浮洗涤沉淀 1-2次,6000 r/min 离心 5 min,完全去除上清;
c) 加入 30 μL 裂解液,充分悬浮菌体,轻弹管壁消除气泡,99℃加热 10 min;
d) 12000 r/min 离心 15 min,上清即为粗提的 DNA,可转移至 0.2 mL 无菌离心管中,在-20℃下可长期保存。
2) 可疑菌落模板 DNA 的制备:挑取可疑菌落,充分悬浮于预先加有 30 μL 裂解液的无菌离心管中,后按照上述步骤 c)、d)操作。
2, 加样、反应
1) 按照需求取 n 个 PCR 反应管(n=1 管阴性对照+待检测样品数+1 管阳性对照),从试剂盒中取出预混液,充分融化,涡旋后短暂离心,以上每管加入 20 μL 预混液,待用。
2) 向上述 n 个反应管中分别加入阴性对照、待测样品 DNA、阳性对照各 5 μL,盖紧管盖,短暂离心,立即进行 PCR 扩增反应。
3) PCR 反应体系为 25 μL,取 FAM 检测通道,在反应阶段 2 中 60℃时收集荧光信号,具体程序如下:
反应阶段 | 温度 | 时间 | 信号收集 | 循环数 |
1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
60°C | 30 sec | ✔ |
3, 结果:一般情况下,可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整,可根据所使用仪器的自身情况(如噪声等)以及选取的不同荧光通道进行调整。
1) 质量控制:阴性对照未出现明显的 S 型扩增曲线或Ct 值>35,阳性对照出现 S 型扩增曲线且其 Ct 值<30。若阴阳性对照未能同时满足上述条件,则本次检测结果无效,应重新检测或与产品技术支持联系。
2) 结果判读:(根据反应所得 Ct 值判读,具体见下表:)
Ct值 | 结果判读 |
≤35 | 阪崎克罗诺杆菌阳性。 |
35~37 | 建议重新检测,若结果 C≥37,则阪崎克罗诺杆菌阴性,反之则为阪崎克罗诺杆菌阳性。 |
≥37 | 阪崎克罗诺杆菌阴性。 |
更多实时荧光PCR检测试剂盒(食源性致病菌检测系列) 产品列表:
货号 | 产品名称 | 用途 |
FZ011BF2 | 小肠结肠炎耶尔森氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测 |
FZ012BF2 | 布鲁氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品中布鲁氏菌的检测 |
FZ013BF2 | 溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品、水产样本中溶藻弧菌的检测 |
FZ014BF2 | 创伤弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品中创伤弧菌的检测 |
FZ015BF2 | 嗜肺军团菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于饮用水、非饮用水、公共场所环境样本中嗜肺军团菌的检测 |
FZ016BF2 | 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 于食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的定性检测 |
FZ017BF2 | 大肠埃希氏菌志贺毒素核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品中致病性大肠埃希氏菌(STEC)产志贺毒素类型的定性检测 |
FZ001BF2 | 铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 包装饮用水等水体中铜绿假单胞菌的定性检测 |
FZ002BF2 | 粪链球菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 包装饮用水等水体中粪链球菌(EF)的定性检测 |
FZ003BF2 | 产气荚膜梭菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品和水体中产气荚膜梭菌的定性检测 |
FZ004BF2 | 金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品样本或可疑菌落中金黄色葡萄球菌的检测 |
FZ005BF2 | 沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品中沙门氏菌的检测 |
FZ006BF2 | 志贺氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品中志贺氏菌的定性检测 |
FZ007BF2 | 单增李斯特氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品中单增李斯特氏菌的检测 |
FZ008BF2 | 副溶血性弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品中副溶血性弧菌的定性检测 |
FZ009BF2 | 大肠埃希氏菌O157:H7核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 用于食品中大肠埃希氏菌O157:H7 的检测 |