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培养基主要营养类原材料生物学检验

发布时间:2022-09-05    浏览次数:130

生物学指标检验是培养基营养类原材料最主要和最关键的指标,直接关系培养基的质量好坏。原材料生产厂家和培养基生产厂家都应重点进行检测。主要检测的指标有可发酵糖试验、H₂S试验、靛基质(吲哚)试验、V-P试验、生长试验、色素试验、菌落总数检测和耐热芽孢杆菌总数等。

1. 可发酵糖试验

称取样品2.0g、氯化钠0.5g、酚红0.002g、蒸馏水或去离子水100mL,配制成溶液,调节其pH值至7. 2~7.4,分装于含有小倒管的试管中,每管6. 0mL,115°C高压灭菌15min后,接种大肠埃希氏菌和鼠伤寒沙门氏菌18h~24h的新鲜培养物,35°C±2°C培养18h~24h,观察结果。阴性结果:培养基颜色为橙红色或红色,不产气。

阳性结果:培养基颜色变成黄色,产气或不产气。

2. H₂S 试验

称取样品1. 0g、氯化钠0.5g、蒸馏水或去离子水100mL,配制成溶液,调节其pH值至7.2~7.6,分装于试管中,每管6.0mL,121°C高压灭菌15min后,接种鼠伤寒沙门氏菌的18h~24h的新鲜培养物,将醋酸铅(PbAc)试纸插入试管中,试纸下端距离液面2cm~3cm,盖好试管盖30°C~35°C培养24h~48h,观察结果。

阳性结果:醋酸铅试纸条变黑,且黑色域不得小于0.5cm。阴性结果:醋酸铅试纸条不变黑或黑色域小于0.5cm。

3. 靛基质(吲哚)试验

称取样品2.0g、氯化钠0.5g、蒸馏水或去离子水100mL,配制成溶液,调节其pH值至7.2~7.6,分装于试管中,每管6.0mL,121°C高压灭菌15min;高压灭菌后,分别接种大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌的18h~24h 的新鲜培养物,35°C±2°C培养18h~24h。观察结果时每管加人2~4滴靛基质试剂。10s内液面上出现玫瑰红色环者为阳性,出现黄色者为阴性。大肠埃希氏菌应为阳性,鼠伤寒沙门氏菌呈阴性。

4. V-P试验

称取样品0.7g、葡萄糖0.5g、氯化钠0.5g,加100mL的蒸馏水或去离子水配制成溶液,调节其pH值7.2~7.4,以每管6.0mL分装,115°C高压灭菌15min后,分别接种产气肠杆菌、大肠埃希氏菌的18h~24h新鲜培养物,35°C±2°C培养18h~24h。观察结果时,除去试管帽,依次加入VP试剂甲、乙液,甲液6滴,乙液2滴,混合均匀,放置36°C培养箱孵育30min,溶液变红色为阳性,不变色为阴性。产气肠杆菌呈阳性反应,大肠埃希氏菌呈阴性反应。

5. 色素试验

称取样品2. 0g、氯化钠0.5g、琼脂1. 2g,加入100mL的蒸馏水或去离子水中,加热完全溶解,调节pH值7.2~7.4,121°C高压灭菌15min。高压灭菌后,待温度降到50°C左右时倾注平板,充分凝固后,四区划线接种金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌的新鲜培养物,35°C±2°C培养18h~24h,观察结果。应生长良好,金黄色葡萄球菌有黄色色素生成,铜绿假单胞菌有绿色色素生成。

6. 生长试验

(1)质控菌株:大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、福氏志贺氏菌、乙型溶血性链球菌。

(2)液体培养基生长试验(九管法)

      1)培养基配制:2.0g样品、0.5g氯化钠,加人到100mL的蒸馏水或去离子水中,加热完全溶解,调节pH值至7.2~7. 4,分装试管,每管9mL,121°C高压灭菌15min后,冷却备用。

      2)操作方法:将质控菌株18h~24h新鲜培养物用无菌水制成10⁸标准菌悬液(与标准比浊管比较),10倍梯度稀释至10⁻⁷,依次接种10⁻⁵、10⁻⁶、10⁻⁷菌悬液于液体培养基管中,每个浓度重复3管,35°C±2°C培养18h~24h。同时用合格品做对照品,样品应与对照品结果基本一样或优于对照品时,判为合格。

(3)固体培养基生长试验(平皿定量滴加法)

      1)培养基配制:2.0g样品、0.5g氯化钠、1.2g琼脂,加入到100mL的蒸馏水或去离子水中,加热完全溶解,调节pH值7.2~7.4,121°C高压灭菌15min后,倒平板,待充分凝固后并倒置于37°C培养箱1h~2h后,备用。

      2)操作方法:制备好的固体培养基,用记号笔成90°C交叉划线分成四份,依次滴加10mL浓度为10⁴CFU/mL、10⁵CFU/mL、10⁶CFU/mL、10⁷CFU/mL的质控菌株菌液(见图4-5-1),轻轻摇动,待菌液吸干后倒置于35°C±2°C培养18h~24h。同时用合格品做对照品,样品应与对照品结果基本一样或优于对照品时,判为合格。

平皿定量滴加法

(4)生长试验结果评判
      1)九管法和平皿定量滴加法都合格时,此原材料适合绝大部分培养基使用。
      2)九管法合格,而平皿定量滴加法不合格时,此原材料适合于大部分液体培养基使用。
      3)九管法不合格,而平皿定量滴加法合格时,此原材料适合于大部分含琼脂培养基使用。
      4)两种都不合格时,此原材料为不合格,最好不要用于配制培养基。

7. 菌落总数检测

称取25g样品溶解于225mL无菌蒸馏水或去离子水后,制成10倍系列稀释液,选取两三个适宜稀释度,吸取1mL样品液涂布于平板计数琼脂(PCA)平板上,36°C±1°C培养48h±2h计数结果,需做2个重复。

8. 耐热芽孢杆菌检测

称取25g样品溶解于225mL无菌蒸馏水或去离子水后,制成10倍系列稀释液,选取两三个适宜稀释度,吸取1mL样品液涂布于葡萄糖胰蛋白胨琼脂平板上,55°C±1°C培养48h±2h计数结果,需做2个重复。
主要营养类原材料的生物学检验指标见表4-5-2。

主要营养类原材料的生物学检验指标