芽孢染色方法——你get到了吗？
发布时间：2023-09-27 浏览次数：4606
通过前文《 一文带您看懂革兰氏染色》的学习，我们都知道，革兰氏染色可以对细菌进行染色，区别其为革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌。但对于带有芽孢的细菌，在革兰氏染色时，却很难着色，如下图，芽孢游离或位于细菌的一端，但均呈空心状，未着色。
芽孢到底是个啥？
芽孢是某些芽孢杆菌属、梭菌属在其生活史后期形成的抗逆性极强的休眠体，呈圆形、椭圆形，壁厚，含水量极低，对热、辐射、化学药物有很强的抗性，因每一个营养体细胞仅产生一个芽孢，所以芽孢无繁殖功能。细菌芽孢正因其特殊的结构和生理过程，所以对各种杀菌处理有极强的抗性，常常导致热杀菌食品腐败变质。
那么我们如何将芽孢进行染色，以便在显微镜下明确观察到呢？
经典芽孢染色法(Scharffer-Fulton)：
Step1：选取培养至合适时期的芽孢菌，在载玻片上进行涂片，加热固定；
Step2：滴加5%孔雀石绿，加热染色5min，使冒蒸汽3-4次，切勿沸腾，中间适当添加染料；
Step3：玻片冷却后，水洗至流出液无色；
Step4：滴加0.5%沙黄复染液，染色1min；
Step5：水洗，干燥镜检。
染色后菌体为红色，芽孢绿色。
此方法的优点在于：孔雀绿染液对芽孢壁和细胞壁的着色能力很差，因此无需脱色，水洗就能洗去芽孢壁和细胞壁上粘附的染料，而进入芽孢核心的部分却不能被脱色。
了解了具体操作过程，操作过程中还需要加强注意哪些方面呢？
经典芽孢染色法(Scharffer-Fulton)操作要点在于：
1、选取合适细菌生长期的细胞，芽孢是产芽孢杆菌在一定培养条件或生长阶段下形成的，选取带有芽孢、营养菌体共存的菌体是本实验成功与否的关键。
2、热固定温度不宜过高，过高温度（超200℃）会导致营养体变形；
3、孔雀绿染液加热充分，需要较高的热度和较长的时间，且不能沸腾，防止液体飞溅；
4、加热过程不能干涸，需要中间添加染液，防止孔雀绿染色在玻片上干涸堆积，造成染色背景模糊，不易观察。
以上就是芽孢染色的步骤和操作要点。怎么样？讲完了，您get到了吗？
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