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关于GB4789.38-2012大肠埃希氏菌平板法常见问题分析
发布时间：2023-10-26 浏览次数：374
自然界中，大肠埃希氏菌广泛存在于人和温血动物的肠道中，其测定数值反映出所在产品的卫生状况，进而推断食品中肠道致病菌污染的可能性，因此其浓度范围也常被赋予严格的限度要求，现行食品大肠埃希氏菌检验方法采用GB4789.38-2012。该标准中大肠埃希氏菌平板法在实施的过程中，应用状况如何呢？
首先一起来看看GB4789.38-2012大肠埃希氏菌平板法具体操作：
很显然，标准中采用的是VRBA倾注凝固后，再覆盖一层VRBA-MUG的形式，那么这样操作紫外灯下的效果如何呢？一起看一下,按此操作方法，菌落形态及荧光情况吧！
灵魂拷问：我知道VRBA中可发酵的糖为乳糖，指示剂为中性红，发酵乳糖产酸的，指示剂变红，大肠杆菌为红色带胆盐沉淀环...那其他肠道菌都不带吗？万一不带沉淀环的与目标菌挨得近，哪里分得出是谁的沉淀环？
☞ 根据大肠杆菌的酶系反应，其含有的葡萄糖醛酸苷酶，作用于4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷（简称MUG）的β糖醛酸苷键，使其水解，释放的4-甲基伞形酮在360~366nm紫外灯下能够产生蓝白色荧光。知道该怎么做了吧？
—— 接下来，我们置于365nm紫外光下观察。
结果紫外光下的荧光弱到几乎看不见…
那么，问题来了：是菌的问题？培养基问题？还是方法问题？我们接着往下聊~
为了验证此问题，我们继续试验。依然采用VRBA培养基+VRBA-MUG培养基、只有VRBA-MUG培养基以及环凯牌大肠杆菌显色培养基（货号CRM003)，测试菌用大肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌混合，分别倾注法和涂布法，同样条件培养后结果：
| 倾注法：（1ml大肠杆菌+弗氏柠檬酸杆菌混合菌液) | |||
| VRBA倾注后覆盖3-4mL VRBA-MUG | VRBA-MUG倾注 | 环凯牌大肠杆菌显色培养基（货号CRM003) | |
| 自然光下 |  |  |  表面及内部菌均显色 |
| 紫外光下 |  弱荧光 |  仅表面菌荧光明显 | / （无需紫外光下观察） |
| VRBA+覆盖3-4ml VRBA-MUG和VRBA-MUG直接倾注，在紫外光下计数，有漏检风险。 | |||
大肠杆菌显色培养基无需紫外灯下计数，安全，且菌落颜色清晰，方便性及特异性优于国标方法。
| 涂布：(0.1ml大肠杆菌+弗氏柠檬酸杆菌混合菌液) | ||
| VRBA-MUG | 环凯牌大肠杆菌显色培养基（货号CRM003) | |
| 自然光下 |  |  |
| 紫外光下 |  | / |
| 对于涂布接种，VRBA-MUG表面接种因紫外光无遮挡可直达菌表面，平板表面菌荧光效果更佳，但因涂布法种量一般为0.1~0.4ml,因此，1ml样液涂布至少3个平板，分别0.3ml、0.3ml、0.4ml。 | ||
