微生物培养基十大问答集锦
发布时间：2023-12-27 浏览次数：274
培养基是微生物试验基础，微生物实验室中的关键物料，对于培养基如何选择、如何保存、如何配制灭菌以及处理过期的培养基等常见问题该如何处理？下面一起来探讨~~~
A1 微生物培养基怎样选择？
根据微生物类别、检测方法、实验室使用习惯等，通过培养基供应商产品目录或官网如：环凯微生物官网 https://www.huankai.com/ 在产品中心进入微生物检测试剂按产品类别(干粉、颗粒、即用型成品平板培养基、即用型管状液体/瓶装/袋装液体培养基等)或行业应用（食品、药品、化妆品、一次性卫生用品、公共卫生、环保水质等）或检测用途（菌落总数、霉菌酵母计数、大肠菌群计数、沙门氏菌检验、金黄色葡萄球菌检验……）进行查询检索，再通过中文名称、英文名称、使用用途、以及配方对比等确认查询到的是否为所需产品。如有不确定的，建议根据配方进行核对选择，或联系技术支持进一步确认。
A2 培养基的保存条件有何要求？
1，建议按照产品说明书的要求放置在推荐的储存条件。储存条件要求干燥避光没有具体温度说明，指的是室温条件。
2，干粉培养基：包装设计能一定程度上抵御光和湿度，但是建议客户还是存放在干燥的环境。干粉培养基是容易吸湿的，所以瓶盖应该尽量保持盖紧。吸水后的干粉可能导致pH变化并且结块。明显结块且不易用药匙压碎的干粉培养基不建议继续使用，因为内部化学成分可能发生变化。
3，对于配好的培养基，最适合的温度是4-12℃且避光保存。装在密闭容器或密封袋中避免污染和水分流失。含有血、卵黄等高营养成分的培养基应该放在2-8℃ 存放。放入密闭容器前的平板需要保持干燥并且温度不能太高。否则在密闭容器中产生太多凝结水会导致污染。失水过多的琼脂可能影响微生物生长，尤其可能影响革兰氏阴性菌。液体培养基过度失水也会导致某些成分的沉淀和结晶。
A3 培养基的有效期如何定义？
未开封使用的培养基，如储存恰当，可参考产品标签和质检报告上的有效期。
对于干粉培养基，开瓶后会频繁操作并接触空气，因此有效期需要重新定义。由于不同实验室的使用习惯和储存条件不同，建议客户进行开瓶有效期验证，规定自己的开瓶有效期。
配制好的培养基，有效期关系到基础成分、配方、配制过程是否合适、灭菌条件、包装、储存条件。每个实验室都应该对不同培养基特有的配制、包装、和储存条件进行验证，以规定自己的配制有效期。具体可参考中国药典培养基适用性、GB4789.28-2013、ISO/TS 11133。
A4 培养基配制是否都需要高压蒸汽灭菌？
培养基配制方法，我们建议首先参考产品说明书上的配制、灭菌操作说明执行。
含有琼脂的干粉培养基需要加热煮沸，因为琼脂的溶点在96°C左右。需要保证各成分充分混匀。热水溶解无法代替加热煮沸。培养基未煮沸状态为浑浊，随着加热煮沸，颗粒溶解，培养基会变澄清，且不含有块状。一般培养基沸腾后，观察到澄清，且没有明显的不溶块状或胶状物即可。
有些培养基含有温度敏感的成分，不能高压灭菌，因此在操作上需要格外注意，需要参考说明书的具体操作。
A5 培养基高压蒸汽灭菌121℃灭菌15分钟，是指灭菌的过程时长吗？
培养基说明书中121℃灭菌15分钟是指高压蒸汽灭菌法，在温度达到121℃，持续灭菌15min。我们建议首先确认灭菌设备的原理为高压蒸汽灭菌法，而且灭菌过程是符合相关灭菌效果验证的，以确保培养基得到有效灭菌。
A6 VRBA培养基标准配制只需煮沸2min不用高压灭菌，那能否采用高压灭菌锅100℃加热30分钟或121℃15分钟方式制备？
建议按标准配制方法使用，如需采用其他制备方法，如：高压灭菌锅100℃加热30分钟或121℃ 15分钟方式制备，实验室需验证高压灭菌法替代煮沸法可行性，验证方案和操作可参考文献《结晶紫中性红胆盐琼脂配制中煮沸与高压灭菌效果比较》。
A7 RV沙门菌增菌培养基115℃灭菌15分钟，灭菌验证F0值小于8，怎么办？
115℃灭菌15min的并不是一个过度灭菌法。虽说该程序不是过度杀灭程序，但是也足够杀灭大多数的微生物，具有很大的安全系数。因此，综合培养基成分和质量性能的灭菌要求，建议该灭菌程序验证内容如下：
1) 115℃ 15min空载热分布：可接受标准（参考PDA TM01及EN285/GB8599）：温度范围所有热电偶115-117℃；灭菌阶段同一时刻各热电偶之间差值≤2℃；温度控制探头与附近热电偶误差≤1.0℃。
2) 115℃ 15min负载热分布（最小及最大装载）：可接受标准：同空载。
3) BI挑战（采用MESA SASU/6 BI）：布点同热分布，可接受标准，BI培养结果阴性，阳性对照阳性。
A8 微生物检验用培养基过期如何处理？
微生物检验用培养基过期物不在《国家危险废物名录》中，参考厂家提供的培养基物料安全数据，明确需处理的培养基是否含腐蚀性、毒性、易燃性、反应性成分。如：营养琼脂成分为蛋白胨、牛肉粉、氯化钠、琼脂，都是营养物质，没有任何危害成分，不需要处理的，当做一般垃圾处理就可以；如：氰化钾生化管中含危化物氰化钾浓度占比为万分之一，丢弃前需于通风橱中将氰化钾生化管全部打开铝盖胶塞将氰化钾培养基和瓶子都浸泡到去毒液（40%氢氧化钾溶液，加入少许硫酸亚铁）中4小时后降低处理即可按固废处理。
对于含危化物成分的培养基，建议统一交给专业废弃物处理企业处理。
A9 过期培养基没有结块受潮是否还能使用？
过期培养基不建议使用。如特殊情况需使用，建议使用前做性能验证，确定过期培养基性能仍能满足试验要求。
A10 培养基配方中的胰蛋白胨，酪蛋白胨，胰酪胨是不是同一种培养基成分?
胰蛋白胨（国内标准） 是一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等，可配制各种微生物培养基，用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定，以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。
酪蛋白胨（胰酪胨）Tryptone又叫胰蛋白胨（进口），又称胰酪蛋白胨（Casein Tryptone）、胰酶消化酪蛋白（Pancreatic digest of casein），胰酶水解酪蛋白、胰酶水解酪素、胰酶水解干酪素等。是采用酪蛋白为原料，经过消化、脱色、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黄色。酪蛋白又称干酪素是从牛奶中提取的一种营养价值很高的磷蛋白，是生产蛋白胨常用的原料。用此原料生产的蛋白胨，其氨基酸比较齐全，特别是色氨酸的含量比较高。所以它在细菌生化试验中最适宜于做靛基质和糖发酵试验。但它缺乏胱氨酸、蛋氨酸等含硫氨基酸，故不适宜做硫化氢试验。
总的来说，胰蛋白胨、酪蛋白胨、胰酪胨是否同种物料，主要看它们生产所用起始物料和水解工艺是否一致，如果一致，那就是同种物料；否则，不是同种物料。
