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质粒DNA小量纯化试剂盒(硅胶膜柱法)

英文名称:Plasmid DNA purification kit(Silica membrane)

货 号 :TQ005D1

规 格 :100次/盒

用途:采用硅胶膜柱法,适合于从1~5 mL 新鲜细菌培养液中提取质粒DNA。

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产品名称:质粒DNA小量纯化试剂盒(硅胶膜柱法)
英文名称:Plasmid DNA purification kit(Silica membrane)

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格
TQ005D1质粒DNA小量纯化试剂盒(硅胶膜柱法)100次/盒

产品简介:本产品采用硅胶膜柱法,适合于从1~5 mL 新鲜细菌培养液中提取质粒DNA。纯化的质粒可直接用于自动测序、酶切、PCR 和标记等。30分钟可以完成数个样品的抽提工作,整个过程不会接触酚氯仿等有机物抽提,也不需醇类沉淀。

储存条件及有效期Buffer P1和RNA酶2~8℃保存,其他可室温保存,有效期1年(储存过程中若溶液产生沉淀,使用前将其在室温放置一段时间或37℃条件下温育,待充分溶解后摇匀即可使用)。

样本类型:新鲜菌体培养液。

质粒DNA小量纯化试剂盒(硅胶膜柱法)试剂盒组成:

序号产品组成规格
1Buffer P126 mL
2RNA酶10 mg
3Buffer P226 mL
4Buffer NP336 mL
5Washing Buffer27 mL(使用前加108 mL无水乙醇)
6Elution Buffer10 mL
7DNA硅胶膜吸附柱100套
8使用说明书1份

质粒DNA小量纯化试剂盒(硅胶膜柱法)试剂盒 使用方法:

● 初次使用前加入0.2~0.5 mL Buffer P1 至RNase A 干粉中,吸打5~10次让RNase A 充分溶解,然后把 RNase A溶解液全部转移至 Buffer P1瓶中,于2-8℃保存;

● 初次使用前请在Washing Buffer中加入108 mL无水乙醇,参见瓶身标签或使用说明书。

   1、将含质粒的菌种接种于含合适抗生素的1~5mL LB肉汤培养基中,37℃摇床培养12~16 小时;
   2、吸取1~5mL菌体,12,000×g 离心2分钟;
   3、倒弃培养基,在吸水纸轻轻拍打吸尽残液。加入 250 μL Buffer P1(已加入RNase A),高速涡旋重悬细菌。
      注意:使用前确保 RNase A 已加到 Buffer P1 中。彻底重悬细菌很关键,重悬后应看不到细菌团块;
   4、往重悬液中加入 250 μL Buffer P2,颠倒混匀 8~10 次。注意:需轻轻颠倒混匀,溶液变得粘稠且透亮表明细菌已充分裂解。如有必要,室温放置2~3分钟,其间颠倒混匀几次。处理多个样品时,这一步操作时间不要超过4分钟;
   5、加入350 μL Buffer NP3,立即颠倒8~10次让溶液彻底中和。加入Buffer NP3 后应立即颠倒混匀,以防止沉淀团聚而影响中和效果,静置2 分钟;
   6、14,000×g 离心5分钟;
   7、将 DNA硅胶膜吸附柱装在收集管中。小心转移离心得到的上清液至柱子中。12,000×g离心60秒;
   8、弃滤液,把柱子套回收集管中。加入 650 μL Washing Buffer (已加入无水乙醇)至柱子中静置30 秒。12,000×g 离心 60 秒;
   9、弃滤液,把柱子套回收集管中。12,000×g 离心3分钟清除残余滤液;

● 将柱子套在灭菌的1.5 mL 离心管中可开盖静置5 分钟让残留的乙醇尽可能挥发干净,乙醇残留会降低OD260/OD230的比值。

   10、把硅胶膜吸附柱套在灭菌的1.5mL 离心管中。根据需求加入30-100μL预热至65℃的 Elution Buffer 或灭菌水至柱子的膜中央。静置 3 分钟,12,000 ×g离心1分钟洗脱DNA。柱子最低的洗脱体积为30 μL。低于30μL会导致洗脱效率下降。若需要获得最高产量,可用洗脱液重复该步骤进行第二次洗脱;

● Elution Buffer可用无菌去离子水替代,但pH值应在8.0~8.5。

● 将Elution Buffer预热到65℃使用,可提高质粒DNA得率。

● 为提高质粒DNA提取得率,可将洗脱得到的溶液再次吸出滴加到吸附柱中央,静置几分钟后再次离心收集。

   11、弃硅胶膜吸附柱,把抽提得到的质粒保存于-20℃。

纯度及浓度检测分析:

1、提取得到的质粒DNA可用紫外分光光度计测量浓度与纯度。
2、DNA在OD 260处有明显的吸收峰,在此条件下,1 OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50 μg/mL;单链DNA或RNA为40 μg/mL;寡核苷酸为20 μg/mL。
3、OD260/280=1.7~1.9,如果A260/280≤1.7或比值过低,表示受到蛋白(芳香族)或酚类物质污染,需要纯化样品。若DNA样品中A260/280>2.0表明样品有RNA或DNA降解。
4、Elution Buffer使用去离子水时候,OD260/280会偏低,但不表示纯度低。

质粒DNA小量纯化试剂盒(硅胶膜柱法)试剂盒 使用注意事项:

1、可先将菌种划线至合适的含抗生素的平板上,待长出单菌落后,挑取长势较好的单菌落接种至含抗生素的LB肉汤中培养12~16 h,这样有利于提高质粒得率。

2、本试剂盒提取使用的器皿、移液器等均应为专用,离心管、枪头等一次性耗材需进行高压灭菌。操作人员应穿戴洁净工作服、口罩、帽子、使用一次性无粉手套。

3、尽量使用新鲜菌液提取,可以降低质粒DNA丢失的风险。

4、Buffer P2使用后需尽快盖上瓶盖,减少与空气中的CO2接触,尽量避免影响提取效果。

5、Washing Buffer使用后盖紧盖子,以免乙醇挥发影响提取效果。

6、如果质粒DNA需长期保存,建议使用Elution Buffer洗脱,分装保存于-20℃或-80℃。

7、请严格按照本说明书操作步骤进行,不同批号的试剂若无特殊说明,请勿混合使用,并保证在有效期内使用该试剂盒,因操作不当导致的质粒DNA提取效果不佳,本公司概不负责。

8、妥善处理所有样本和试剂材料,彻底清洁和消毒操作台面。