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Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP)(规格:250U ×5 | 货号:HKE031-01B)

英文名称:Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP)

货 号 :HKE031-01B

规 格 :250U ×5

用途:用于要求保真度比较高的PCR反应

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产品名称:Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP)
中文名称:快速Pfu DNA聚合酶(with dNTP)

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍产品价格
HKE031-01BFast Pfu DNA Polymerase(with dNTP)250U ×5快速Pfu DNA聚合酶 

产品描述:本制品是通过采用分子进化技术对普通Pfu酶进行改造而获得的 新型Fast Pfu酶,是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶解决了高保真PCR反应中Pfu酶扩增灵敏度低、延伸速度缓慢的难题,能够高效、快速扩增≤6kb片段目的基因片段(最长可达20kb),模板低至0.05ng, 并且在DNA末端补平、全基因合成、引入突变等之中有着很好的应用。

产品特点:
      高保真:保真度高于Pfu酶,为普通Taq酶的50倍。
      快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上。扩增长度可达20kb,能高效扩增≤6kb片段。
      高灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出1.2kb特定基因片段,扩增性能显著优于普通Pfu酶。
      独特配方的 5×Buffer:使PCR 扩增反应更加稳定、灵敏、高效。

产品用途:用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成、DNA末端补平等,也用于复杂模板, 高GC/AT 模板的扩增。

使用建议:(Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平末端,无3´端"A"突出, 除使用环凯PCR一步定向克隆试剂盒(Cat. No: HKNR001)外, 其它PCR 产物的克隆方案有:)
      1)PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。
      2)将产物3´末端加A后再与T载体连接。
      3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20~30mers。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系,并最后加入Fast Pfu DNA聚合酶。

应用实例:图例一)50μL 扩增体系中,λDNA 为模板,扩增 1kb~20kb 片段。

50μL 扩增体系中,λDNA 为模板,扩增 1kb~20kb 片段。

泳道 M:λ/Hind III DNA Marker; 
泳道 1:1kb;
泳道 2:2kb;
泳道 3:4kb;
泳道 4:6kb; 
泳道 5:8kb;
泳道 6:10kb; 
泳道7:12kb;
泳道 8:20kb

保存温度:-20℃。

产品包装(A 包装):

产品包装(A 包装)

活性定义:在74℃条件下,30 分钟内催化 10nmol dNTPs 掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。。

常用反应体系(50μL):

常用反应体系(50μL)

常用PCR 循环:

常用PCR 循环

注意事项:
      1)对高 GC 含量模板,建议将变性温度提高到 98℃。
      2)对于高 GC 模板,建议配套使用 PCR 增强剂 I(Cat. No: HKE050)和 PCR 增强剂 II(Cat. No: HKE051),或者添加终浓度为 5%-8% DMSO。