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Bst DNA Polymerase, Large Fragment(编号:HKE015-02A | 规格:800U)

英文名称:Bst DNA Polymerase, Large Fragment

货 号 :HKE015-02A

规 格 :800U

用途:双链 DNA 5'突出端补平法标记;

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产品名称:Bst DNA Polymerase, Large Fragment(with dNTP)
中文名称:Bst DNA聚合酶,大片段(with dNTP)

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍产品价格
HKE015-02ABst DNA Polymerase, Large Fragment800UBst DNA聚合酶,大片段 

产品描述:Bst DNA聚合酶大片段是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分,来源于E.coli菌株。利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。该酶具有5´→3´DNA聚合酶活性, 但不具有5´→3´外切核酸酶活性。本制品可应用于DNA测序、DNA 标记和等温DNA扩增等。

产品特点:
      链置换活性强。
      高灵敏度。
      最佳活性温度为 65℃,恒温扩增,无需热循环仪。

产品用途:
      1)富含 GC 序列的 DNA 序列测定;
      2)微量(纳克量)DNA 模板的快速测序;
      3)随机引物 DNA 标记;
      4)双链 DNA 5'突出端补平法标记;
      5)可用于等温 DNA 扩增,如环介导等温扩增(LAMP),全基因组扩增(WGA),解旋酶恒温基因扩增(HDA)等。

应用实例:图例)Bst DNA 聚合酶大片段用于LAMP 实验,以 M13 ssDNA 为模板, 以 F3/B3,FIP/BIP 为引物,65℃反应1 小时后,进行琼脂糖凝胶电泳检测。

使用普通(A组)及含染料(B组)的2×Taq Master Mix配制的50μl扩增体系,以5ng λDNA为模板, 对500bp~6.0kb片段的扩增结果

泳道M:1kb DNA Ladder ;
泳道 1:LAMP 扩增产物。

反应体系(25μL)如下:

10×Bst LF Buffer2.5μL
F3/B30.2μM(终浓度)
FIP/BIP0.8μM(终浓度)
甜菜碱1M(终浓度)
dNTPs400μM(终浓度)
M13 ssDNA 模板2μL
Bst DNA 聚合酶Large Fragment1μL(8U)
ddH2O至 25μL

保存温度:-20℃。

产品包装(A 包装):

产品包装(A 包装)

质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一的目的条带,qPCR 方法检测无大肠杆菌 DNA 残留,无核酸内、外切酶污染。

活性定义:65℃条件下,30分钟内使10nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

10×反应缓冲液:200mM Tris-HCl,100mM (NH4)2SO4,500mM KCl,20mM MgSO4,1% Tween 20,pH8.8。

保存体系:50 mM KCl,10 mM Tris-HCl (pH 7.5),1mM DTT, 0.1 mM EDTA,0.1% Triton X-100 和 50% Glycerol。

反应条件:1×反应缓冲液,65℃温浴。

热失活:80℃,10 分钟。

注意事项:
      1)Bst DNA 聚合酶不具有 3´→5´外切酶活性;
      2)长期贮存需加入 100μg/mL BSA 或 0.1% Triton X-100;
      3)建议反应温度不要超过 70℃;
      4)Bst DNA 聚合酶不能用于热循环测序或PCR。