产品名称：细菌基因组 DNA 纯化试剂盒（硅胶膜柱法）
英文名称：Bacterial DNA purification kit（Silica membrane）
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 |
| TQ001D0 | 细菌基因组 DNA 纯化试剂盒（硅胶膜柱法） | 50 份/盒 |
产品简介：用于细菌基因组 DNA 的小量提取，其原理是利用细胞裂解释放基因组 DNA；随后利用蛋白酶 K 降解膜蛋白和缠绕 DNA 的核蛋白，使 DNA 充分游离；硅胶膜离心过滤可逆吸附基因组 DNA；洗除蛋白质、脂质等杂质后，用洗脱液洗脱获得高纯度基因组DNA。使用本试剂盒提取的 DNA 可用于各种常规分子实验操作，包括酶切、PCR、分子杂交等实验。
储存条件及有效期：室温保存，有效期一年，2~8℃条件下储存更佳，储存过程中若溶液产生沉淀，使用前将其在室温放置一段时间或 37℃条件下温育，待充分溶解后摇匀即可使用。
样本类型：新鲜细菌培养液或菌落悬浮液。
试剂盒组成：
| 序号 | 产品组成 | 规格 |
| 1 | 悬浮液 | 15 mL |
| 2 | 裂解液 | 15 mL |
| 3 | 去蛋白缓冲液 | 24 mL（使用前加 16 mL 无水乙醇） |
| 4 | 漂洗液 | 15 mL（使用前加 60 mL 无水乙醇） |
| 5 | 洗脱液 | 10 mL |
| 6 | DNA 硅胶膜吸附柱 | 50 套 |
| 7 | 使用说明书 | 1 份 |
选配试剂：蛋白酶 K、溶菌酶。
提取得率：1 mL 纯培养菌液对数生长期的菌液（106~108cells）基因组DNA 的提取量分别为：革兰氏阴性菌 6~25 μg，革兰氏阳性菌为6~15 μg；OD260/280=1.7~1.9。
细菌基因组 DNA 纯化试剂盒（硅胶膜柱法）使用方法：
● 初次使用前请在去蛋白缓冲液和漂洗液中加入无水乙醇，参见瓶身标签或使用说明书。
1， 吸取 1~2 mL 对数生长期细菌培养液于 1.5 mL 离心管中。12,000 r/min 离心 1 min，尽量吸除上清。
2， 对革兰氏阴性菌，向离心得到的菌体沉淀中加入200 μL悬浮液，涡旋振荡至充分悬浮。
3， 对革兰氏阳性菌，需加入溶菌酶辅助破壁处理。具体方法为：向步骤1中收集的菌体沉淀加入120 μL悬浮液，充分悬浮后加入 80 μL 的溶菌酶，37℃水浴 30 min。
● 如目标菌未知革兰氏属性，按照革兰氏阳性菌提取流程处理。
● 如需要去除 RNA，可加入 4 μL RNase A （100 mg/mL）溶液，震荡混匀后，室温放置 5 min。
4， 加入 20 μL 蛋白酶 K，55℃水浴 30 min。
5， 加入 220 μL 裂解液，涡旋振荡混匀，65℃水浴或金属浴 10 min，溶液形成清亮的悬浮液。
● 裂解液加入后会产生白色沉淀，一般水浴或金属浴后会消失，不会影响后续提取。如溶液未变清亮，说明细菌裂解不彻底，可能导致 DNA 提取量减少或不纯。如提取菌体超过 1.5 mL，可适当延长温育时间。
6， 加入 220 μL 无水乙醇，振荡混匀，此时可能出现白色絮状沉淀，简短离心将内壁的液体离心到管底。
7， 将所得的溶液和絮状沉淀全部加入 DNA 硅胶膜吸附柱上（吸附柱套入收集管中），12,000 r/min 离心 1 min，倒掉滤液，吸附柱套回收集管。
● 溶液中基因组 DNA 吸附在硅胶膜上，如发生堵塞，说明提取的菌体过量，应适当减少菌量或延长离心时间，直到所有的溶液顺利离心到收集管中为止。
8， 加入 500 μL 去蛋白缓冲液，12,000 r/min 离心 1 min，倒掉滤液，吸附柱套回收集管。
♦ 去蛋白缓冲液初次使用前加入 16 mL 无水乙醇。
9，加入 500 μL 漂洗液，12,000 r/min 离心 1 min，倒掉滤液，吸附柱套回收集管。
♦ 漂洗液初次使用前加入 60 mL 无水乙醇。
10，再次加入 500 μL 漂洗液，12,000 r/min 离心 1 min，倒掉滤液，吸附柱套回收集管，再次 12,000 r/min 离心 1 min，彻底去除吸附柱中残留的液体，室温放置 2 min，去除残留的乙醇。
11，将吸附柱套入新的 1.5 mL 无菌的离心管中，向吸附柱中央处悬空滴加 50~100 μL 洗脱液，室温静置 5 min，12,000 r/min 离心 2 min，离心得到的液体转移到无菌的EP 管中，-20℃保存待用。
● 洗脱液可用无菌去离子水替代，但 pH 值应在 8.0~8.5。
● 将洗脱液预热到 60℃使用，可提高基因组 DNA 得率。
● 为提高基因组 DNA 提取得率，可将洗脱得到的溶液再次吸出滴加到吸附柱中央，静置几分钟后再次离心收集。
