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TQ001D0 细菌基因组 DNA 纯化试剂盒(硅胶膜柱法)

英文名称:Taq DNA PolymeraseBacterial DNA purification kit(Silica membrane)

货 号 :TQ001D0

规 格 :50 份/盒

用途:用于细菌基因组 DNA 的小量提取

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产品名称:细菌基因组 DNA 纯化试剂盒(硅胶膜柱法)
英文名称:Bacterial DNA purification kit(Silica membrane)

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格
TQ001D0细菌基因组 DNA 纯化试剂盒(硅胶膜柱法)50 份/盒

产品简介:用于细菌基因组 DNA 的小量提取,其原理是利用细胞裂解释放基因组 DNA;随后利用蛋白酶 K 降解膜蛋白和缠绕 DNA 的核蛋白,使 DNA 充分游离;硅胶膜离心过滤可逆吸附基因组 DNA;洗除蛋白质、脂质等杂质后,用洗脱液洗脱获得高纯度基因组DNA。使用本试剂盒提取的 DNA 可用于各种常规分子实验操作,包括酶切、PCR、分子杂交等实验。

储存条件及有效期:室温保存,有效期一年,2~8℃条件下储存更佳,储存过程中若溶液产生沉淀,使用前将其在室温放置一段时间或 37℃条件下温育,待充分溶解后摇匀即可使用。

样本类型:新鲜细菌培养液或菌落悬浮液。

试剂盒组成:

序号产品组成规格
1悬浮液15 mL
2裂解液15 mL
3去蛋白缓冲液24 mL(使用前加 16 mL 无水乙醇)
4漂洗液15 mL(使用前加 60 mL 无水乙醇)
5洗脱液10 mL
6DNA 硅胶膜吸附柱50 套
7使用说明书1 份

选配试剂:蛋白酶 K、溶菌酶。

提取得率:1 mL 纯培养菌液对数生长期的菌液(106~108cells)基因组DNA 的提取量分别为:革兰氏阴性菌 6~25 μg,革兰氏阳性菌为6~15 μg;OD260/280=1.7~1.9。

细菌基因组 DNA 纯化试剂盒(硅胶膜柱法)使用方法:

● 初次使用前请在去蛋白缓冲液和漂洗液中加入无水乙醇,参见瓶身标签或使用说明书。

1, 吸取 1~2 mL 对数生长期细菌培养液于 1.5 mL 离心管中。12,000 r/min 离心 1 min,尽量吸除上清。
2, 对革兰氏阴性菌,向离心得到的菌体沉淀中加入200 μL悬浮液,涡旋振荡至充分悬浮。
3, 对革兰氏阳性菌,需加入溶菌酶辅助破壁处理。具体方法为:向步骤1中收集的菌体沉淀加入120 μL悬浮液,充分悬浮后加入 80 μL 的溶菌酶,37℃水浴 30 min。

● 如目标菌未知革兰氏属性,按照革兰氏阳性菌提取流程处理。
● 如需要去除 RNA,可加入 4 μL RNase A (100 mg/mL)溶液,震荡混匀后,室温放置 5 min。

4, 加入 20 μL 蛋白酶 K,55℃水浴 30 min。
5, 加入 220 μL 裂解液,涡旋振荡混匀,65℃水浴或金属浴 10 min,溶液形成清亮的悬浮液。

● 裂解液加入后会产生白色沉淀,一般水浴或金属浴后会消失,不会影响后续提取。如溶液未变清亮,说明细菌裂解不彻底,可能导致 DNA 提取量减少或不纯。如提取菌体超过 1.5 mL,可适当延长温育时间。

6, 加入 220 μL 无水乙醇,振荡混匀,此时可能出现白色絮状沉淀,简短离心将内壁的液体离心到管底。
7, 将所得的溶液和絮状沉淀全部加入 DNA 硅胶膜吸附柱上(吸附柱套入收集管中),12,000 r/min 离心 1 min,倒掉滤液,吸附柱套回收集管。

● 溶液中基因组 DNA 吸附在硅胶膜上,如发生堵塞,说明提取的菌体过量,应适当减少菌量或延长离心时间,直到所有的溶液顺利离心到收集管中为止。

8, 加入 500 μL 去蛋白缓冲液,12,000 r/min 离心 1 min,倒掉滤液,吸附柱套回收集管。

♦ 去蛋白缓冲液初次使用前加入 16 mL 无水乙醇。

9,加入 500 μL 漂洗液,12,000 r/min 离心 1 min,倒掉滤液,吸附柱套回收集管。

♦ 漂洗液初次使用前加入 60 mL 无水乙醇。

10,再次加入 500 μL 漂洗液,12,000 r/min 离心 1 min,倒掉滤液,吸附柱套回收集管,再次 12,000 r/min 离心 1 min,彻底去除吸附柱中残留的液体,室温放置 2 min,去除残留的乙醇。
11,将吸附柱套入新的 1.5 mL 无菌的离心管中,向吸附柱中央处悬空滴加 50~100 μL 洗脱液,室温静置 5 min,12,000 r/min 离心 2 min,离心得到的液体转移到无菌的EP 管中,-20℃保存待用。

● 洗脱液可用无菌去离子水替代,但 pH 值应在 8.0~8.5。 
● 将洗脱液预热到 60℃使用,可提高基因组 DNA 得率。
● 为提高基因组 DNA 提取得率,可将洗脱得到的溶液再次吸出滴加到吸附柱中央,静置几分钟后再次离心收集。