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HKT004系列 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix

英文名称:2×pSC-T vector Fast Ligation Mix

货 号 :HKT004系列

规 格 :20次 | 20次×5

用途:专用 T 载体

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产品名称:2×pSC-T vector Fast Ligation Mix

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKT004-01A2×pSC-T vector Fast Ligation Mix20次T载体540
HKT004-01B20次×52398

产品描述:
      Simple Cloning T-vector 是一种 PCR 产物高效 TA 克隆 的专用 T 载体,它由 pUC18 载体改造而成,去除了 PCR 产 物插入区域两侧所有的酶切位点。PCR 产物克隆后如果使 用其两端的酶切位点进行酶切时,T载体上不会有相同的酶 切位点影响酶切反应,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆 成 功率。多克隆位点的消除并不影响 β-半乳糖苷酶的正常表 达,PCR 产物克隆后仍可以利用 α-互补性进行蓝白斑筛选, 挑选阳性克隆。
      传统T 载体在进行连接时的操作程序是:载体、片段、 T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在传统模 式上将除了插入片段的各成分进行预混,并使其在稳定性、 转化子数目、阳性率方面不低于传统模式,使用时只需加入插入片段即可,大大简化了操作过程,降低了配制连接体系 过程中的误差和污染率,节省了时间。

产品特点:
      高效:快速连接,15 分钟即可完成连接反应。
      稳定:-20℃取出反复冻融 20 次,克隆数目及阳性率 不受影响。
      快捷:只需加入插入片段在补充去热源水到 10μL 体系

使用建议:
      1)连接使用的 PCR 片段3' 端应带有 A 末端,如果是使用 pfu 等高保真聚合酶扩增的不带 A 末端的平末端片段, 不 可直接用于进行连接反应。
      2)克隆时使用的 Insert DNA 片段(PCR 产物)建议进行 切胶回收纯化,否则 PCR 产物中的短片段 DNA、残留引 物等杂质都会影响 TA 克隆效率。    
      3)转化过程中建议使用 Control Insert DNA 做对照,以便 在实验出现问题时确定原因。

保存温度:-20℃

2×pSC-T vector Fast Ligation Mix 产品包装(A包装):

2×pSC-T vector Fast Ligation Mix 产品包装(A包装)

质量保证:
   Control Insert 克隆后的白色菌落中,有 90%以上 含有 Insert DNA 片段。 
   Control Insert 经克隆后,经测序确认''T''突出的存在。

操作方法:

1) 快速连接反应体系:

组分体积
2×pSC-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL)10μL
目的PCR 片段/ Control Insert DNAX μL/1μL
ddH2O至 20μL

反应条件:16℃或 25℃下,保温15至30分钟。
      注:保温5分钟也能正常进行连接反应,但反应效率略 为降低。25℃下进行连接,其效果略差于16℃下连接效果。 而更高的温度(>26℃)则较难形成环状DNA。

2)取10μL加入至100μL感受态细胞中,用移液枪吹打 混合,冰上放置30分钟。 
3)将离心管置于42℃水浴中,热击60-90秒,迅速将离 心管置于冰上,放置2-3分钟。 
4)向每个离心管中加入500μL无菌不含抗生素的LB 或SOC培养基中,37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟,使 质粒上氨苄抗性基因表达,菌体复苏。
5)吸取 200μL 已转化的感受态细胞,加到含氨苄青霉素的 LB 或 SOC 固体平板上,用无菌涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃培 养箱里直至液体完全吸收,倒置培养 12-16 小时。
6) PCR 检测,利用试剂盒自带的高速PCR 扩增试剂 2×FastTaq Mast Mix 直接进行菌落PCR 鉴定。

pSC-T结构图