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2×pED-T vector Fast Ligation Mix(规格:20次 | 货号:HKT005-01A)

英文名称:2×pED-T vector Fast Ligation Mix

货 号 :HKT005-01A

规 格 :20次

用途:专用T载体

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产品名称:2×pED-T vector Fast Ligation Mix

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKT005-01A2×pED-T vector Fast Ligation Mix20次T载体540

产品描述:
      Easy Digestion T-vector 是一种PCR产物高效TA克隆的 专用T载体,它由pTZ19R载体改造而成。Easy Digestion T-vector在插入位点两端特别设计了两个BamH I 位点,使插 入片段可以用BamH I单酶切检测及亚克隆,另外还可以使用 非常廉价和高效的EcoR I与Hind III双酶切检测及亚克隆。
      传统 T 载体在进行连接时的操作程序是:载体、片段、T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在传统模式上 将除了插入片段的各成分进行预混,并使其在稳定性、转化子 数目、阳性率方面不低于传统模式,使用时只需加入插入片段即 可,大大简化了操作过程,降低了配制连接体系过程中的误差 和污染率,节省了时间。

产品特点:
      高效:快速连接,15 分钟即可完成连接反应。
      稳定:-20℃取出反复冻融 20 次,克隆数目及阳性率不 受影响。
      快捷:只需加入插入片段再补充去热源水到10μL体系。
      便利:附赠 2×Taq Master Mix ,2×Fast Taq Master Mix ( 快速 PCR 系统 ) ,及 DNA Ladder 2000 Plus,满足您的 PCR 鉴定、电泳实验需求。

使用建议:
      1)连接使用的 PCR 片段 3'端应带有 A 末端,如果是使用 Pfu 等高保真聚合酶扩增的不带 A 末端的平末端片段,不可 直接用于进行连接反应。
      2)克隆时使用的 Insert DNA 片段(PCR 产物)建议进行切 胶回收纯化,否则 PCR 产物中的短片段 DNA、残留引物等 杂质都会影响 TA 克隆效率。 
      3)转化过程中建议使用 Control Insert DNA 做对照,以便在 实验出现问题时确定原因。

保存温度:-20℃

2×pED-T vector Fast Ligation Mix 产品包装(A包装):

2×pED-T vector Fast Ligation Mix 产品包装(A包装)

质量保证:
   Control Insert 克隆后的白色菌落中,有 90% 以上含 有Insert DNA 片段。 
   Control Insert 经克隆后,经测序确认''T''突出的存在。

操作方法:

1) 快速连接反应体系:

组分体积
2×pED-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL )10μL
目的PCR 片段/ Control Insert DNAX μL/1μL
ddH2O至 20μL

反应条件:16℃或 25℃下,保温15至30分钟。
      注:保温5分钟也能正常进行连接反应,但反应效率略 为降低。25℃下进行连接,其效果略差于16℃下连接效 果。而更高的温度(>26℃)则较难形 成环状DNA。

2) 取10μL 加入至100μL 感受态细胞中,用移液枪 吹打混合,冰上放置30分钟。 
3) 将离心管置于42℃水浴中,热击60-90秒,迅速 将离心管置于冰上,放置2-3分钟。 
4) 向每个离心管中加入500μL 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC培养基中,37℃摇床,150rpm振荡培 养45分钟,使质粒上氨苄抗性基因表达,菌体复 苏。
5)吸取 200μL 已转化的感受态细胞,加到含氨苄青霉素 的 LB 或SOC 固体平板上,用无菌涂布棒将细胞均匀涂 开,将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全吸收,倒置 培养 12-16 小时。 
6) PCR 检测,利用试剂盒自带的高速 PCR 扩 增试 剂 2×FastTaq Mast Mix 直接进行菌落PCR 鉴定。

pED-T结构图