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Chaperone Competent Cells BL21(DE3) Series(感受态细胞)

英文名称:Chaperone Competent Cells BL21(DE3) Series

货 号 :HKV206-01A

规 格 :100μl×2×5种

用途:感受态细胞

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产品名称:Chaperone Competent Cells BL21(DE3) Series

中文名称:伴侣感受态细胞 BL21(DE3) 系列

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKV206-01AChaperone Competent Cells BL21(DE3) Series100μl×2×5种感受态细胞935

产品描述:
      本制品是由五种分别转化一种伴侣蛋白质粒(Chaperone Plasmid)的 E.coli BL21(DE3)制成的感受态细胞。
      E.coli 普遍用作蛋白质表达的宿主,因为其表达系统简单且 有广泛选择。然而,在 E.coli 中表达的外源蛋白质常常会发生各 种问题,例如,形成不溶的包涵体(Inclusion bodies)以及被蛋 白酶降解等。原因大多是表达的蛋白质没有进行正确的折叠造成 的。分子伴侣参与蛋白质折叠过程,且人们已经通过大量的实验 研究来表明体内蛋白折叠机理。 本制品中含有五种类型的质粒 (pG-KJE8、pKJE7、pG-Tf2、pTf16、 pGro7),每一种质粒都是 能有效表达一 组协同作 用 、共同参与 蛋白 折叠的 被 称作 ''Chaperone team''的分子伴侣。靶蛋白与其中一种''Chaperone team''共同表达,便可增加可溶性蛋白质的比例。
      注意:本产品不可用于电击法转化。

产品特点:
      本制品每种感受态含有一组伴侣蛋白质粒,可增加可溶性蛋 白质的比例。
      适用于 pCold,pET 系列蛋白质表达体系。

基因型:E.coli BL21(DE3)来源于 B 株,为 Lon 蛋白水解酶、ompT 外膜蛋白水解酶缺陷型。

转化效率:使用 pUC19 质粒检测,转化效率≥1×10⁶ cfu/μg。

保存温度:-70℃

Chaperone Competent Cells BL21(DE3) Series 产品包装(A包装):

产品组成体积
pG-KJE8/BL21(DE3)100μl × 2
pKJE7/BL21(DE3)100μl × 2
pG-Tf2/BL21(DE3)100μl × 2
pTf16/BL21(DE3)100μl × 2
pGro7/BL21(DE3)100μl × 2

操作方法:
      1)取感受态细胞置于冰浴中,一次转化感受态细 胞的用量为 50-100μl,可根据实际情况分装使用。所 用 DNA 的体积不要超过感受态细胞的十分之一,以下 实验以 100μl 感受态细胞为例。
       2)待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加 入目的 DNA(通常 100μl 感受态细胞能够被 1ng 超螺 旋质粒 DNA 所饱和),用移液枪吹打混合,冰上放置 30 分钟。
       3)将离心管置于 42℃水浴中,热击 60-90 秒,迅 速将离心管置于冰上,放置 2-3 分钟。
       4)向每个离心管中加入 500μl 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培养基中,37℃摇床,150rpm 振荡培养 45 分钟,使质粒上相关抗性基因表达,菌体复苏。
       5)吸取 200μl 已转化的感受态细胞,加到含氯霉 素和质粒上相应抗生素的 LB 或 SOC 固体平板上,用 无菌涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃培养 箱 里直至液体完全吸收,倒置培养 12~16 小时。涂 布量 应根据具体实验调整,如果转化的 DNA 总量较 多,可 取少量转化产物涂布平板,如果预计的克隆数 较少, 可 3000rpm 离心 5 分钟,吸取部分培养基, 悬浮菌体 后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在 置于 4℃冰 箱保存,如果次日转化菌落数过少,可 以将剩余菌液 再涂布在新平板上。

注意事项:
      1)感受态细胞应保存于-70℃冰箱中,不可反复 冻融,或放置时间过长,避免感受态转化效率降低。
      2)实验操作时,应注意无菌条件。
      3)实验过程中,可保留部分连接反应液,当转化 不成功时,可重新转化。