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HKV207-01A Biotin Competent Cell(感受态细胞)

英文名称:Biotin Competent Cell

货 号 :HKV207-01A

规 格 :100μl×10支

用途:感受态细胞

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产品名称:Biotin Competent Cell
中文名称:Biotin 感受态细胞

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKV207-01ABiotin Competent Cell100μl×10支感受态细胞620

产品描述:
      Biotin 修饰的蛋白质是用于蛋白质相互作用研究中的有力工 具,通过目标蛋白融合表达 Avi Tag,可实现位点特异性的 Biotin 修饰,可最大限度的减少对蛋白质活性的影响。Avi Tag 的 Biotin 修 饰 可 以 在 体 内 或 体 外 ( Avi-Biotinylation Kit , Cat.No : HKPE013)进行。Biotin Competent Cell 是含有高表达 Avi Tag 生 物 素 化 酶 的 BL21 ( DE3 ) 感 受 态 细 胞 。 配 合 使 用 pAvi-C (Cat.No:HKV104)载体可获得最佳生物素修饰效果。
      注意:宿主菌为氯霉素抗性。

产品特点:
      高效表达 Avi Tag 生物素化酶。
      实现目标蛋白 Biotin 修饰。

基因型:E.coli BL21(DE3)来源于 B 株,为 Lon 蛋白水解酶、ompT 外膜蛋白水解酶缺陷型。

转化效率:使用 pUC19 质粒检测,转化效率≥1×10⁶cfu/μg。

保存温度:-70℃

Biotin Competent Cell 产品包装(A包装):

产品组成体积
Biotin Competent Cell100μl×10 
Control DNA pUC19(1ng/μl)10μl

操作方法:
      1)取感受态细胞置于冰浴中,一次转化感受态细 胞的用量为 50-100μl,可根据实际情况分装使用。所 用 DNA 的体积不要超过感受态细胞的十分之一,以下 实验以 100μl 感受态细胞为例。
       2)待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加 入目的 DNA(通常 100μl 感受态细胞能够被 1ng 超螺 旋质粒 DNA 所饱和),用移液枪吹打混合,冰上放置 30 分钟。
       3)将离心管置于 42℃水浴中,热击 60-90 秒,迅 速将离心管置于冰上,放置 2-3 分钟。
       4)向每个离心管中加入 500μl 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培养基中,37℃摇床,150rpm 振荡培养 45 分钟,使质粒上相关抗性基因表达,菌体复苏。
       5)吸取 200μl 已转化的感受态细胞,加到含氯霉 素和质粒上相应抗生素的 LB 或 SOC 固体平板上,用 无菌涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃培养箱 里直至液体完全吸收,倒置培养 12~16 小时。涂布量 应根据具体实验调整,如果转化的 DNA 总量较多,可 取少量转化产物涂布平板,如果预计的克隆数较少, 可 3000rpm 离心 5 分钟,吸取部分培养基,悬浮菌体 后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰 箱中保存,如果第二日转化菌落数过少,可以将剩余 菌液再涂布在新的平板上。

注意事项:
      1)感受态细胞应保存于-70℃冰箱中,不可反复 冻融,或放置时间过长,避免感受态转化效率降低。
      2)实验操作时,应注意无菌条件。
      3)实验过程中,可保留部分连接反应液,当转化 不成功时,可重新转化。