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HKV212-01A Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell(感受态细胞)

英文名称:Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell

货 号 :HKV212-01A

规 格 :100μl×10支

用途:感受态细胞

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产品名称:Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell
中文名称:Rosetta(DE3)plysS 感受态细胞

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKV212-01ARosetta (DE3) pLysS Competent Cell100μl×10支感受态细胞386

产品描述:Rosetta 菌株是携带氯霉素抗性质粒 BL21 的衍生菌,补充大肠杆菌缺乏的 6 种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA)对应的 tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。本产品是经特殊工艺制作得到的感受态细胞,可用于DNA 的化学转化。

产品特点:
      适用于T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主,T7 噬菌体 RNA 聚合酶基因的表达受控于 λ 噬菌体 DE3 区 的 lacUV5 启动子,该区整合于 BL21 的染色体上。
      适用于非毒性蛋白的表达。

基因型:


转化效率:使用 pUC19 质粒检测,转化效率可达 10⁷ cfu/μg。

保存温度:-70℃

Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell 产品包装(A包装):

产品组成体积
Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell100μl×10 
Control DNA pUC19(1ng/μl)10μl

操作方法:
      1)取感受态细胞置于冰浴中,一次转化感受态细胞的用量为 50-100μl,可根据实际情况分装使用。所用 DNA 的体积不要超过感受态细胞的十分之一,以下实验以 100μl 感受态细胞为例。
       2)待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(通常 100μl 感受态细胞能够被1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和),用移液枪吹打混合,冰上放置 30 分钟。
       3)将离心管置于 42℃水浴中,热击 60-90 秒,迅速将离心管置于冰上,放置 2-3 分钟。
       4)向每个离心管中加入 500μl 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培养基中,37℃摇床,150rpm 振荡培养 45 分钟,使质粒上相关抗性基因表达,菌体复苏。
       5)吸取 200μl 已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的 LB 或 SOC 固体平板上,用无菌涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全吸收,倒置培养 12-16 小时。涂布量应根据具体实验调整,如果转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板,如果预计的克隆数较少,可 3000rpm 离心 5 分钟,吸取部分培养基,悬浮菌体后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存,如果第二日转化菌落数过少,可以将剩余菌液再涂布在新的平板上。

注意事项:
      1)感受态细胞应保存于-70℃冰箱中,不可反复冻融,或放置时间过长,避免感受态转化效率降低。
      2)实验操作时,应注意无菌条件。
      3)实验过程中,可保留部分连接反应液,当转化不成功时,可重新转化。