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HKE376 NLS-Cas9(D10A) Nickase(内切酶)

英文名称:NLS-Cas9(D10A) Nickase

货 号 :HKE376

规 格 :50μg/盒

用途:内切酶

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产品名称:NLS-Cas9(D10A) Nickase
中文名称:NLS-Cas9(D10A) 内切酶

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKE376NLS-Cas9(D10A) Nickase50μg/盒crispr基因编辑(内切酶)1575

产品描述:
      CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统,改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系统在基因的定点修饰中展现出巨大的应用潜能。脱靶效应是目前 CRISPR/Cas9 技术应用的一个难题,在基因编辑应用中,可能会出现难以预测的后果。
      本制品为 spCas9 Nuclease 的一个突变体。Cas9 Nuclease 具有两个切割活性中心,从而实现在 sgRNA 靶序列特定位点引入 DNA 双链断裂(DSB)。NLS-Cas9(D10A)Nickase 在 Cas9 Nuclease 基础上突变其中一个切割活性中心,其能在与 sgRNA 靶序列互补的DNA 链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,并且通过在蛋白两端加了核定位序列(NLS),可把蛋白送到细胞核内进行基因组编辑, 配合一对 gRNA 使用,可实现 Cas9 Nuclease 相同的基因编辑效果,由于有效的识别序列由 20 bp 增加至 40 bp,可明显减少意外的脱靶基因修饰,从而显著提高 CRISPR/Cas9 技术基因修饰的特异性。

产品特点:纯蛋白体系,避免 CRISPR 基因敲除时引入质粒或病毒干扰; 可显著降低脱靶效应。

产品用途:
      1,基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲除;
      2,基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲入;
      3,sgRNA 剪切靶点 DNA 效率检测,降低体内筛选成本;
      4,体外剪切靶 DNA 的特异位点。

应用实例:图例)NLS-Cas9(D10A) Nickase DNA 切割活性检测:

NLS-Cas9(D10A) Nickase DNA 切割活性检测

      带有靶位点的超螺旋 DNA(cccDNA);
      酶切产生切刻后的开环 DNA(ocDNA);
      50 -100 ng 酶可有效切割 cccDNA(>95%)。

保存体系:10mM Tris-HCl,300mM NaCl,0.1mM EDTA,50% Glycerol, PH7.4,25℃。

保存温度:-20℃保存,或-80℃长期保存。

NLS-Cas9(D10A) Nickase 产品包装(A包装):

产品组成体积
NLS-Cas9(D10A) Nickase(0.1 μg/μl)500 μL
10×Reaction Buffer1 ml

质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一的目的条带,纯度达 95%;内毒素含量< 0.1EU/μg;qPCR 方法检测无大肠杆菌基因组残留;无 RNase、核酸内、外切酶污染。

体外切割体系(20μL):

Supercoiled DNA200 ng
sgRNA200 ng
NLS-Cas9(D10A) Nickase50-100 ng
10×Reaction Buffer2 μl
RNase Free WaterTo 20 μl

37 ℃保温 1 h、70℃保温 10 min 
注:在反应体系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl,防止RNase 污染。

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* 为 Cas9(D10A) Nickase,能在与 sgRNA 靶序列互补的 DNA 链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,可以减少意外的脱靶基因修饰。
** 为 Cas9(H840A) Nickase,能在与 sgRNA 靶序列非互补的DNA 链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,可以减少意外的脱靶基因修饰。
***为 Cas9(D10A,H840A)Nuclease,具有靶 DNA 结合活性,但无切割活性,可用于阴性对照等用途。