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HKE372 SaCas9 Nuclease(核酸酶)

英文名称:SaCas9 Nuclease

货 号 :HKE372

规 格 :50μg/盒

用途:核酸酶

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产品名称:SaCas9 Nuclease
中文名称:SaCas9 核酸酶

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKE372SaCas9 Nuclease50μg/盒crispr基因编辑(核酸酶)1365

产品描述:
      CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。CRISPR/Cas9 系统将入侵噬菌体和质粒 DNA 的片段整合到 CRISPR 序列中,并利用相应的 CRISPR RNAs(crRNAs)来指导 Cas9 蛋白对同源序列的降解,从而提高免疫性。人工改造过的 Cas9/sgRNA 系统通过 sgRNA(short guide RNA)引导 Cas9 蛋白 识别并剪切带有 sgRNA 靶点的双链 DNA,可用于基因敲除和精确编辑 DNA 等操作。
      SaCas9 Nuclease 识别 5'-NNGRRT-3' PAM 序列,较长的 PAM序列具有更高的特异性。此外,该酶蛋白分子量相对于 SpCas9 较小,在电转时具有更高的转化效率。本产品提供的 Cas9 核酸内切酶通过在蛋白两端加了核定位信号(NLS),可使蛋白进入细胞核内进行基因组编辑。

产品特点:可显著降低脱靶效应; 纯蛋白体系,避免 CRISPR 基因敲除时引入质粒或病毒干扰。

产品用途:
      1,基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲除;
      2,基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲入;
      3,sgRNA 剪切靶点 DNA 效率检测,降低体内筛选成本;
      4,体外剪切靶 DNA 的特异位点。

应用实例:图例)SaCas9 Nuclease 做 DNA 片段切割活性检测:

带有靶位点的DNA 片段为 1500bp,酶切后的片段为 1000bp 和 500bp。

NLS-Cas9 Nuclease应用实例

保存温度:-20℃保存,或-80℃长期保存。

SaCas9 Nuclease 产品包装(A包装):

产品组成体积
SaCas9 Nuclease(1μg/μl)50 μL
10× SaCas9 Reaction Buffer500μl

保存体系:20mM HEPES,500mM KCl,0.1Mm DTT,1%Sucrose,PH7.5,25℃。

质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一的目的条带,纯度达 95%;内毒素含量<100EU/mg;qPCR 方法检测无大肠杆菌基因组残留;无 RNase、核酸内、外切酶污染。

体外切割体系(20μL):

dsDNA200 ng
sgRNA200 ng
SaCas9 Nuclease0.2-1 ug
10× SaCas9 Reaction Buffer2 μl
RNase Free WaterTo 20 μl

37 ℃保温 1 h、70℃保温 10 min 
注:在反应体系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl,防止RNase 污染。

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* 为 Cas9 D10A Nickase,能在与 sgRNA 靶序列互补的 DNA 链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,可以减少意外的脱靶基因修饰。
** 为 Cas9 H840A Nickase,能在与 sgRNA 靶序列非互补的DNA 链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,可以减少意外的脱靶基因修饰。
***为 Cas9(D10A,H840A) Nuclease,为 Cas9D10A,H840A 双突变失活酶,具有靶 DNA 结合活性,但无切割活性,可用于阴性对照等用途。