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HKE373-YH01-01A Cas12a Nuclease(核酸酶)(2.5μg/μl)

英文名称:Cas12a Nuclease(2.5μg/μl)

货 号 :HKE373-YH01-01A

规 格 :2.5μg/μl

用途:核酸酶

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产品名称:Cas12a Nuclease(2.5μg/μl)
中文名称:Cas12a 核酸酶

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKE373-YH01-01ACas12a Nuclease(2.5μg/μl)50μg/盒(2.5μg/μl)crispr基因编辑(核酸酶)1365

产品描述:
      CRISPR/Cas 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一 种适应性免疫防御系统。CRISPR 相关蛋白 Cas9 已经广泛应用 于基因组编辑,相比于 Cas9 蛋白,Cas12a 具有类似的基因组编 辑效率,但具有较低的脱靶效率,在基因治疗应用中具有巨大 的 潜力。
      不同于 Cas9 蛋白,Cas12a 不需要 tracrRNA,只需要单个由 41-44nt 核苷酸组成的 crRNA 引导。这非常有利于基因组编辑,因 为 Cas12a 不仅比 Cas9 小,而且还具有较小的 crRNA 分子(接 近 Cas9 的总 sgRNA 的一半)。与 Cas9 需要富含 G 的 PAM 相 反, Cas12a-crRNA 复合物通过识别富含 T(5'-TTTN-3')的 PAM 基 序来切割靶 DNA。Cas12a 执行剪切后的 DNA 双链断裂 引入了 4 或 5 个核苷酸突出的粘性末端。这促使 Cas12a 可以作 为一种新 型的基因检测和成像的工具。
      本制品在蛋白两端分别加了核定位信号(NLS),当 Cas12a 以 NLS 序列表达时,Cas12a-RNP 复合体可以在进入细胞后立即 定位到细胞核。无需体内转录或翻译,提高了该方法在质粒系 统上的效率。

产品特点:
      1) 纯蛋白体系,避免 CRISPR 基因敲除时引入质粒或病毒干扰;
      2) 可显著降低脱靶效应。

产品用途:
      1,基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲除;
      2,基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲入;
      3,sgRNA 剪切靶点 DNA 效率检测,降低体内筛选成本;
      4,体外剪切靶 DNA 的特异位点。

应用实例:图例)Cas12a Nuclease 做 DNA 片段体外切割活性检测:
带有靶位点的 DNA 片段约为 2000bp,酶切后的片段为 1600bp 和 400bp。

Cas12a Nuclease 做 DNA 片段体外切割活性检测

保存温度:-20℃保存,或-80℃长期保存。

Cas12a Nuclease(2.5μg/μl) 产品包装(A包装):

产品组成体积
Cas12a Nuclease (2.5μg/μl)20 μL
10× Cas12a Reaction Buffer1ml

质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一的 目的条带,纯度达 95%;内毒素含量< 100EU/mg;qPCR 方法检测无大肠杆菌基因组残留;无 RNase、核酸内、外 切酶污染。

体外切割体系(20μL):

dsDNA200 ng
sgRNA200 ng
Cas12a Nuclease0.5-1.5 μg
10× Cas12a Reaction Buffer2 μl
RNase Free WaterTo 20 μl

37 ℃保温 1 h、70℃保温 10 min 
注:在反应体系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl,防止 dsDNA 不 纯 导致 sgRNA 的降解。

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* 为 Cas9(D10A) Nickase,能在与 sgRNA 靶序列互补的 DNA 链上 产生切口,从而形成功能性的单链断裂,可减少意外的脱靶基因修饰。
** 为 Cas9(H840A) Nickase,能在 sgRNA 靶序列所在的 DNA 链上 产 生切口,从而形成功能性的单链断裂,可减少意外的脱靶基因修饰。
***为 Cas9 D10A,H840A 双突变失活酶,具有靶 DNA 结合活性,但 无 切割活性,可用于阴性对照等用途。