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HKM027系列 Circleligase Ⅱ(环状连接酶)

英文名称:Circleligase Ⅱ

货 号 :HKM027系列

规 格 :10次 | 50次

用途:催化具有 5'-磷酸基团和 …

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产品名称:Circleligase Ⅱ
中文名称:环状连接酶

产品编号与包装规格:

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HKM027系列Circleligase Ⅱ10次 | 50次热稳定性环状连接酶
HKM027-01ACircleligase Ⅱ10次960
HKM027-01B环状连接酶50次4288

产品描述:Circleligase II 是一种热稳定性酶,可以在没有互补序列存在的情 况下催化具有 5'-磷酸基团和 3'-羟基基团的单链 DNA(ssDNA)/单 链 RNA (ssRNA)的自环化,该反应不依赖于 ATP。

产品特点:
      ◐可在标准反应条件下,高效催化长度为 15-200nt 的 ssDNA / ssRNA 发生链内环化;
      ◑可催化单链底物与 5'磷酸化/腺苷酸化的单链 DNA 接头连接。

产品用途:
      1) 产生环状的单链 DNA 分子,用于滚环复制或者滚环转录的实 验研究。
      2) 用于 cfDNA/ctDNA 测序,甲基化测序等。

检测方法: 
      1)连接产物经 20% 聚丙烯酰胺/8 M 尿素的 PAGE 胶检测,线 性 DNA 分子的迁移速度较环状 DNA 分子快。
      2)加入核酸外切酶 I ( Exo I ),37℃反应 45min,线性 DNA 被 完全消化,而环状单链 DNA 分子不受外切酶的影响。Exonuclease I, 能够从 ssDNA 的 3'-OH 末端分解生成 5'-单核苷酸,对 ss DNA 具 有较高的特异性,不分解双链 DNA 及 RNA。

检测结果:
      图:Circleligase II 连接结果检测(变性 PAGE 胶)

Circleligase II 连接结果检测(变性 PAGE 胶)

lane1:未经 Circleligase II 和外切酶处理的 70nt 线性单链 DNA;
lane2:Circleligase II 处理后的 70nt 单链 DNA 环化产物;
lane3:70nt 线性单链 DNA 环化产物经 Exo I 酶切处理结果;

保存温度:-20 ℃保存,或- 80℃长期保存。

Circleligase Ⅱ 产品包装:

产品组成A 包装B 包装
Circleligase Ⅱ (100U/μl)1000U5000U
5×Circleligase Ⅱ Reaction Buffer100μl500μl
50mM Mncl₂20μl100μl
ssDNA Control oligo(5pmol/μl)5μl5μl
RNase free water500μl1ml×2

质量控制:所有组分经检测均无大肠杆菌 DNA 残留,无核酸 内/外切酶、磷酸酶以及 RNA 酶活性污染。

活性定义:60℃条件下,1 小时内催化 1pmol 的标准线性单 链寡核苷酸(70nt,5' 磷酸化)转换成抗核酸外切酶 I 消化的环状结构所需要的酶量定义为 1 个活性单位。

常用反应体系(20μl):

产品组成体积
Circleligase Ⅱ (100U/μl)1μl
5×Circleligase Ⅱ Reaction Buffer4μl
50mM Mncl₂1μl
ssDNA1-10pmol
RNase free waterTo 20μl

注: 1) ssDNA (15-200nt 环化效率较高)应含有 5'-磷酸基 团和 3'-羟基基团;
      2)若实验有特殊需要,可缩短反应时间至 30min, 若为复杂模板,反应时间应适量延长或增加酶量。

反应条件:
      1×反应缓冲液条件下,60℃温育 1h。
      80℃,10 分钟热失活。

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