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NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit(NGS第二链cDNA合成试剂盒)

英文名称:NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit

货 号 :HKN422系列

规 格 :20次 | 100次

用途:用于二代测 序(NGS)文库构建中 cDNA 第二链的合成

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产品名称:NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit
中文名称:NGS第二链cDNA合成试剂盒

产品编号与包装规格:

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HKN422系列NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit20次 | 100次crispr基因编辑(合成双链cDNA试剂盒)
HKN422ANGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit20次2220
HKN422BNGS第二链cDNA合成试剂盒100次9958

产品描述:NGS Second-Strand cDNA Synthesis kit 是一种在合成了 cDNA 第一链的基础上去除 RNA-DNA 杂合链中的 RNA 链,并合成 cDNA 第二链,最终形成双链 cDNA 的试剂盒。主要用于二代测 序(NGS)文库构建中 cDNA 第二链的合成。

产品特点:
      1) 本试剂盒包含了进行 cDNA 第二链合成所需的各种试剂, 简便,高效;
      2) 合成的双链 cDNA,可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、 cDNA 文库的构建等。

应用实例:

1、cDNA 第二链合成
      模板:采用体外转录 RNA 为模板逆转录得到 810bp cDNA

cDNA 第二链合成

      M:DL2000;
      泳道 1:逆转录得到 cDNA 第一链;
      泳道 2:protein cDNA 第二链合成试剂盒得到 cDNA 第二链;
      泳道 3:A 公司 cDNA 第二链合成试剂盒得到 cDNA 第二链;

2、cDNA 第二链合成产物酶切验证
      DNase I 能消化 DNA-RNA 杂合链中的 DNA 和 dsDNA,而 RNase H 消化 DNA-RNA 杂合链中的 RNA,不消化 dsRNA。

cDNA 第二链合成产物酶切验证

      M:DL2000;
      泳道 1:cDNA 第一链;
      泳道 2:cDNA 第一链+DNase I;
      泳道 3:cDNA 第一链+RNaseH;
      泳道 4:cDNA 第二链;
      泳道 5:cDNA 第二链+DNase I;
      泳道 6:cDNA 第二链+ RNaseH;

NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit 产品包装:

产品组成A包装B包装
NGS Second-Strand
DNA Synthesis Enzyme Mix
100μl500μl
NGS Second-Strand
cDNA Synthesis Reaction Buffer
500μl1ml×3
RNase Free Water1ml×21ml×6

操作方法:

1,在冰上向已完成的 cDNA 第一链 20μl 反应体 系中依次加入如下试剂:

产品组成体积
First-Strand Synthesis product20ul
Second-Strand cDNA Synthesis Enzyme Mix5μl
Second-Strand cDNA Synthesis Reaction Buffer20μl
RNase free water55ul

2,按上述体系轻轻混匀,随后离心沉淀液体。
3,16℃孵育 2 小时,热盖温度不超过 40℃。
4,75℃ 热 失 活 20min ; 或 加 入 5μl 0.5M EDTA(pH8.0)终止反应。
5,后续使用磁珠纯化、酚氯仿抽提、乙醇沉淀 等方法纯化合成的双链 cDNA,也可以使用 适应的 DNA 纯化试剂盒进行纯化。