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NGS End Repair/dA-Tailing Module(24次)

英文名称:NGS End Repair/dA-Tailing Module

货 号 :HKM055A

规 格 :24次/盒

用途:用于双链 DNA 片段的末端修复…

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产品名称:NGS End Repair/dA-Tailing Module

产品编号与包装规格:

编号产品名称规格产品介绍价格
HKM055ANGS End Repair/dA-Tailing Module24次/盒NGS末端修复2325

产品描述:

      NGS End Repair/dA-Tailing Module 为 illumina 高通量测序 平台文库构建配套模块,能够对超声处理、化学处理、酶处理 的片 段化 双 链 DNA或 小 片 段 DNA的 末 端 进行 修复 , 使 DNA 双链形成平末端,并分别在片段化 DNA 两端添加 5'-P 和 3' 端 dA,所得产物无需纯化,直接用于 NGS Fast Ligation Module(货号:HKM066)进行 DNA 片段的 adapter 连接。本 试剂盒采用一步法反应流程,省去了多步纯化步骤,可对极低 DNA 样本进行高效、快速末端修复及 dA 尾添加,操作更加简 便,文库转化效率更高。
      适用范围:用于双链 DNA 片段的末端修复及 3'端添加 dA, 适用于 illumina 高通量测序平台。
      适用样本量:1ng~1µg DNA。

产品特点:
      1) 操作简便,一步完成双链 DNA 片段的末端修复、dA 添加 反 应;
      2) 文库转化率高,DNA 样本起始量可低至 1ng。

注意事项:
      1、开始实验前,对 DNA 浓度精确定量至关重要,推荐 DNA 上样量为 1ng-1µg。DNA可溶解于去离子水、10 mM Tris Buffer EB 或 0.1×TE 等。
      2、推荐 DNA 的上样量指的是片段化后的 dsDNA 的量。推荐 使用 Qubit、Picogreen 或者其他染料法对 DNA 浓度进行精确定 量。
      3、请确认 DNA 溶液中不含阳离子及螯合剂,如果 DNA 溶解 于 1×TE 或不确定 DNA 溶液中的 EDTA 浓度,需先对 DNA 进行纯化后再进行片段化反应。

保存温度:所有组分-20℃保存,尽量避免反复冻融。

NGS End Repair/dA-Tailing Module 产品包装:

产品组成A 包装(24 次)B 包装(96 次)
End-repair And A-tailing Enzyme Mix120μl480μl
End-repair And A-tailing Reaction Buffer100μl400μl
RNase Free Water1ml1ml×4

操作方法:

1,将 End-repair And A-tailing Reaction Buffer 和 End-repair And A-tailing Enzyme Mix 置于冰上融化, 轻轻颠倒混匀。

2,在 200μl 的 Nuclease-Free 管中按下表配制反应体 系,冰上操作,各组分加入后,请轻柔吸打混匀,注 意不要涡旋

Fragmented DNAX
Endrepair and A-tailling Reaction Buffer4μl
RNase Free Water Upto 40μl

3,向步骤 2 中的 Nuclease-Free 管中加入 5µl End-repair And A-tailing Enzyme Mix,轻柔吹打 6-8 次, 不要涡旋。
      注:此过程需一直处于冰浴中进行。

4,将配置好反应体系的 Nuclease-Free 管放入 4℃预 冷的 PCR 仪中,并开启以下 PCR 程序:

热盖 105℃on
20℃15min
72℃15min
4℃Hold

5,当反应程序结束后,将 Nuclease-Free 管从 PCR 仪中取出并置冰上。

6,立即进入接头连接步骤,为保证连接效率,推荐 使用 NGS Fast Ligation Module(HKM066)。