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国际上沙门氏菌检验在增菌环节的差异分析

发布时间:2022-04-19    浏览次数:200

文章来源:六扇门Study公众号

沙门氏菌检验标准公开征求意见

GB4789.4 《品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验于2019 年11月正式启动修订,标准经过一年多的修订,于2021 年 11 月 29 日经第二届食品安全国家标准审评委员会微生物检验方法与规程专业委员会第七次会议审查通过,现进行标准公开征求意见

小六赶紧对比了GB4789.4 -2016版、GB4789.4 征求意见版、ISO、美国FDA/BAM方法的增菌环节的差异,分享给各位小伙伴们。

小六号召:
      大家在能力范围内积极支持标准制修订工作,结合实际工作经验,为GB4789.4征求意见稿提出意见!这有助于提高本次标准修订效率和实用性,毕竟将来标准是我们来使用哈。
      点击“阅读原文”转发到微信即可参加标准征求意见反馈,或者“复制下方链接到网页版”即可参加标准征求意见反馈。
      https://sppt.cfsa.net.cn:8086/cfsa_aiguo

前增菌环节差异分析

前增菌环节差异分析

1、增菌培养基

FDA/BAM 方法主要使用的前增菌液为乳糖肉汤(LB )增菌液(BAM方法使用的前增菌处理根据不同的样品特性,使用的前增菌培养基不同),此外还有:
   通用肉汤(UPB)、胰酪胨大豆肉汤(TSB)、四硫磺酸盐煌绿基础(TTB,不加煌绿)、缓冲蛋白胨水(BPW)、复溶脱脂乳粉等。
GB 4789.4和 ISO 6579-1:2017 方法使用的前增菌液为缓冲蛋白胨水(BPW)增菌液

LB 增菌液(LB )增菌液(主要成分为牛肉膏、蛋白胨、乳糖, pH 为 6.9±0.2,)的营养较BPW 增菌液(主要成分为蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾, pH 为 7.2±0.2)更丰富,但BPW 增菌液的缓冲能力更强

想了解更多BAM方法相关培养基适用范围,可关注六扇门Study公众号发布的文章《一眼读懂国际主要沙门氏菌检验方法之异同》。

2、操作环节

(1)样品稀释处理:GB 4789.4和 ISO 6579-1:2017 方法都是25g(mL)+225mL BPW前处理,GB4789.4方法是36 ℃±1 ℃, 8 h~18 h; ISO 6579-1:2017 为36℃±2℃,18±2h,整体相差不大。而美国FDA/BAM方法则是25g+225mL样品LB(也可以按照1:9的比例制备样品),35℃±2℃,24±2h,也就是取样可根据相应比例进行处理。

(2)乳粉的前处理:GB4789-XXX本次征求意见稿、ISO 6579-1:2017 、美国FDA/BAM都采取了室温浸泡法,即:无菌操作称取 25 g /25 mL样品,缓缓倾倒在广口瓶或均质袋内 225 mL BPW 的液体表面(BAM方法也可以按照1:9的比例制备样品),暂不混匀和调节 pH,室温静置 1 h 后再混匀。

主要原因:乳粉是经过高温喷雾干燥的产品,其中的沙门氏菌一般处于受损状态。乳粉中沙门氏菌检验的前处理,如果进行快速混匀,适应了乳粉干燥环境的受损沙门氏菌可能会出现渗透压休克。采用浸泡法室温静置一段时间后再进行预增菌,可以促进受损沙门氏菌的复苏。

选择性增菌环节差异分析

选择性增菌环节差异分析

二次增菌液选择上,FDA/BAM 主要为 TTB 和 RV (大部分食品), ISO为 RVS/MSRV 和MKTTn , GB 4789.4-2016为 TTB 和 SC ;GB4789.4-XXXX征求意见为 RVS 和 TTB 。RV 和 RVS 增菌液的成分基本一致(但 RVS 用大豆胨代替了蛋白胨,更有利于沙门氏菌的复苏)。MKTTn较 TTB增菌液增加了新生霉素, 其余成分基本一致, 新生霉素可以抑制大肠群菌和其他革兰氏阳性杆菌。FDA/BAM 在不同类型样本的前处理方法有区别。

几种选择性培养基介绍:
      RV: 含大豆胨、六水合氯化镁、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、孔雀绿、蒸馏水。孔雀绿能够抑制非沙门氏菌的生长。
      RVS: 主要成分与RV基本一致,但用大豆胨代替了蛋白胨,更有利于沙门氏菌的复苏
      MSRV : 含胰蛋白胨 、酪蛋白水解物 、氯化钠 、磷酸二氢钾 、氯化镁(无水) 、孔雀绿草酸盐、琼脂 、蒸馏水,需要添加新霉素一起使用。
      TTB: 含蛋白胨、胆盐、碳酸钙、硫代硫酸钠、蒸馏水。牛胆盐和煌绿可抑制大肠群菌和其它革兰氏阳性细菌。
      MKTTn: 胰蛋白胨、牛肉粉 、氯化钠 、碳酸钙 、牛胆盐 、硫代硫酸钠、煌绿 、新生霉素 、蒸馏水。牛胆盐、新生霉素可抑制大肠群菌和其它革兰氏阳性杆菌。

由于SC 适用于伤寒沙门氏菌的选择性增菌,我国伤寒、副伤寒的发病率已从10 例/10 万下降到 0.8 例/10万左右,本次GB4789修订用 RVS 代替 SC 作为食品中沙门氏菌检验的选择性增菌液。

与此同时,GB4789.40-XXXX《食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌检验》和GB XXXX- XXXX《食品微生物学检验 产志贺毒素大肠埃希氏菌检验》也在征求意见中,欢迎大家积极发表意见。