English

体外培养细胞的常见问题

发布时间:2022-06-08    浏览次数:106

问题可能原因建议解决方法
培养液 pH值变化太快CO₂张力不对。(1)按培养液中 NaHCO₃浓度增加或减少培养箱内CO₂浓度,2.0g/L 到 3.7g/L 浓度NaHCO₃对应CO₂浓度为 5% 到10% 。
(2)改用不依赖 CO₂培养液。
培养瓶盖拧得太紧。松开瓶盖1/4圈。
NaHCO₃缓冲系统缓冲力不足。
培养液中盐浓度不正确
HEPES缓冲液至10 到25mM终浓度。
在 CO₂培养环境中改用基于 Earle's 盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用 Hanks 盐配制的培养液。
细菌、酵母或真菌污染丢弃培养物。
或用抗生素除菌。
培养液出现沉淀,但 pH 值不变用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来用去离子水反复冲洗玻璃器皿,然后除菌。
冰冻保存培养液将培养液加热到37℃,摇动使其溶解如沉淀仍然存在,丢弃培养液。
培养液出现沉淀,同时pH发生变化细菌或真菌污染丢弃培养物。
或用抗生素除菌。
培养细胞不贴壁胰蛋白酶消化过度缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。
分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。
支原体污染
培养液中无贴壁因子
悬浮细胞成簇

培养液中含钙、镁离子

支原体污染

蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放 DNA

用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞,轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。

分离培养物,检测支原体。如发现支原体污染,丢弃培养物。

用 DNaseⅠ处理细胞。

原代细 胞培养物污染原代培养组织在进入培养前已污染培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。
培养细胞生长减慢

由于更换不同培养液或血清

比较新培养液与原培养液成分,比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。

增加起始培养细胞浓度。

让细胞逐渐适应新培养液。

换入新鲜配制培养液。

补加谷氨酰胺或生长因子。

用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物。或用抗生素除菌。

血清需保存在-5℃ 到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存,并在2周内用完。

培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。

培养物中有少量细菌或真菌污染试剂保存不当

接种细胞起始浓度太低

细胞已老化

支原体污染

增加接种细胞起始浓度。

换用新的保种细胞。

分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。

培养细胞死亡
 

培养箱内无CO₂

培养箱内温度波动太大

细胞冻存或复苏过程中损伤

培养液渗透压不正确

检测培养箱内CO2 

检查培养箱内温度

取新的保存细胞种

检测培养液渗透压。注意∶大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260-350 mOsm/kg。加入额外试剂如 HEPES 或药物都有可能影响培养液渗透压。

培养液种有毒代谢产物堆积

接种细胞起始浓度太低

细胞已老化

支原体污染

换入新鲜培养液

增加接种细胞起始浓度。

换用新的保种细胞。

分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。

培养液种有毒代谢产物堆积换入新鲜培养液