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干粉培养基配置及使用时可能出现的问题与分析

发布时间:2022-06-22    浏览次数:75

1,使用干粉培养基需要注意的问题

1) 干粉培养基及原材料
      ● 适宜保存在温度为15 ~ 30°C的阴凉干燥的环境中
      ● 应在产品外包装上标注开封使用的日期
      ● 使用前应检查干粉的理化属性是否正常

2) 玻璃与塑料器皿
      ● 采用优质低碱性的硅酸盐材料的玻璃器皿
      ● 避免洗涤剂残留在器皿的表面
      ● 滴加酸碱指示剂检验器皿上酸或碱的残留,如滴加几滴溴甲酚紫,酸性则指示剂呈黄色,碱性则指示剂呈蓝色
      ● 弃去有蚀刻划痕或破裂的器皿

3) 仪器设备
      ● 定期对实验室仪器设备进行校准,如天平、pH计、高压灭菌锅、水浴锅等

4) 水
      ● 使用蒸馏水或去离子水

5) 溶解培养基
      ● 按照标签上的说明准确称量培养基
      ● 加入适量的蒸馏水或去离子水加热至完全溶解,溶解过程中不断搅动培养基溶液,避免局部过热

6) 高压灭菌
      ● 按照标签上的说明设定一定的温度和时间高压灭菌
      ● 超过规定的灭菌时间或温度,可能造成培养基中营养成分或某些抑制剂的破坏

7) 附加试剂
      ● 产品需要单独添加的试剂(抑菌剂、血、血清等)必须是在培养基灭菌后冷却至50C左右时加入
      ● 加入附加试剂后,需充分混匀

8) 培养基灭菌后分装
      ● 分装前使培养基冷却至50C左右,并摇匀培养基
      ● 在超净台或超净间迅速分装。若铺平板,分装培养基后,掀盖敞开- -小口,使培养基表面干燥

9) 保存
      ● 一般来说,对于配制好的培养基,密封包装后放置2~ 8C冰箱中可保存1~2周

2、干粉培养基配制中的常见问题及原因

1) pH改变
      ● 配制培养基使用的水不符合要求
      ● 配置过程中培养基温度过高,超过标签上规定的灭菌温度或时间
      ● 没有加热充分溶解
      ● 反复复溶
      ● 保存条件不当
      ● 器皿上有残留的化学试剂
      ● 未在培养基冷却时测定pH

2) 出现沉淀、浑浊
      ● 配制培养基使用的水不符合要求
      ● 没有充分加热溶解

3) 颜色变深
      ● 局部加热过度出现焦化
      ● 反复复溶

4) 凝胶强度下降
      ● 加入水的量不准确
      ● 培养基中的琼脂没有完全溶解
      ● 培养基的pH值不正常
      ● 反复复溶

5) 菌生长差或者菌落不典型
      ● 加热灭菌时间过长
      ● 反复复溶
      ● 未充分混匀培养基
      ● 添加抗生素等试剂的量不准确
      ● 染菌