生长曲线法评估胆盐抑菌能力
发布时间：2022-11-02 浏览次数：3187
为了精确评估胆盐的抑菌能力，正确指导不同种类、不同批次胆盐的最适用量。赵贵明等人利用全自动生长曲线分析仪，设置对照品和固定测试菌株，通过比较对照品胆盐与测试品胆盐对于敏感性测试菌株的 MIC 和 MBC 值，得以精确测定胆盐的效价。通过此方法，比较了不同品牌不同批次的胆盐对不同菌的抑制效果，很好的指导了胆盐的最适用量。具体内容如下：
(1)测试用菌株及试剂
藤黄微球菌(Micrococcus Luteus )菌种号(ATCC 49732)或表皮葡萄球菌( Staphylo-coccus epidermidis )菌种号(ATCC 12228)、3号胆盐(Oxoid)、磷酸盐缓冲溶液、生理盐水、待测胆盐、去氧胆酸钠，哥伦比亚血琼脂平板(Oxoid)、TSB液体培养基(Oxoid)。
(2)仪器设备
恒温培养箱、高压灭菌锅、微量移液器(20μL~200μL、100μL~1000uL)、麦氏比浊管、比浊仪、Bioscreen全自动生长曲线分析仪。
(3)菌悬液的制备
将敏感性测试菌株活化后接种于哥伦比亚血琼脂平板，经36°C±1°C培养 18h~24h，直至出现明显菌落。挑取3~5个菌落，分散于TSB液体培养基中制成菌悬液。将菌悬液的浊度调整至0.5 麦氏比浊标准，此时菌悬液的浓度为 1.5×10⁸ CFU/mL。
(4)不同浓度胆盐培养基的制备
向TSB液体培养基中加人作为标准的 Oxoid 3号胆盐，配置成胆盐浓度分别为0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25% 和 0.3% 的TSB液体培养基。其他待测胆盐按照相应比例配成相应的 TSB液体培养基，待测胆盐浓度最大设置为 0.5%。
(5) MIC 和 MBC 的测定
取30μL菌悬液接种于 270μL 相应的含胆盐的TSB培养基中，置于 Bioscreen 全自动生长曲线分析仪中，37°C培养48h，每15min 测一次浊度值。测试菌株的生长曲线见图4-7-2。每个实验测试 3 个平行样，取平均值绘制菌种生长曲线，最小抑菌浓度 MIC 是胆盐能够完全抑制细菌生长的最低药物浓度，记录不同胆盐对敏感性测试菌株的 MIC 值。
48h之后，在全自动生长曲线分析仪中每一个样品管中取 200μL 菌液均匀的涂在哥伦比亚血琼脂平板上，36°C±°1C培养48h，观察平板上的菌落数。最小杀菌浓度 MBC 是胆盐能够杀死 99.9% 的细菌(降低3个数量级)所需的最低药物浓度，记录不同胆盐对敏感性测试菌株的MBC值。
通过比较对照品胆盐与测试品胆盐对于敏感性测试菌株的 MIC 和 MBC (见表4-7-1)，进而评估测试样品的抑菌能力，指导胆盐、去氧胆酸钠在培养基中的准确用量，提高培养基的适用性。
表4-7-1 对照品胆盐与测试品胆盐对于敏感性测试菌株的 MIC 和 MBC 值
还可以比较分析不同结构的胆汁酸对不同菌株的抑菌能力(见表4-7-2)。
表4-7-2 不同结构胆盐对于敏感性测试菌株的 MIC 和 MBC 值
通过实验，得知胆盐的抑菌效果与胆汁酸羟基位置和所抑制的菌种相关。如抑制藤黄微球菌的效果比较，猪胆盐(3𝛂，6𝛂，7𝛂)>牛胆盐(3𝜶，7𝛂，12𝛂)>3号胆盐(混合胆盐)>脱氧胆盐(3𝛂，12𝛂)；抑制表皮葡萄球菌时，猪胆盐(3𝛂，6𝛂，7𝛂)>脱氧胆盐(3𝛂，12𝛂)>牛胆盐(3𝛂，7𝛂，12𝛂)>3号胆盐(混合胆盐)。
来源：《微生物培养基及其原材料质量控制》电子书
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