金黄色葡萄球菌检测标准要点解析
发布时间：2023-05-30 浏览次数：1237
第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
1、7.5%氯化钠肉汤培养基增菌培养：
（1）若样品本身在均质后清澈，培养18h观察呈现一定程度的浑浊（与培养前相比），则接种平板；若18h后仍无变化，继续培养至24h后无论浑浊与否都接种至平板；
（2）若样品本身在均质后浑浊，则直接培养至24h后再接种平板。
2、血平板：36±1℃培养18h后观察，若有菌落生长或有菌落生长的迹象（无论是否溶血），则应酌情配制NA、BHI并分装至小试管中（NA 10mL/管、BHI 5mL/管）、灭菌后NA应斜放凝固成琼脂斜面备用。至血平板培养至24h取出，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，同时挑取菌落接种至NA斜面、BHI肉汤管，36±1℃培养24h。
3、接种原则：
（1）革兰氏染色后还剩余10个或10个以上菌落，则NA、BHI分别接种5管；
（2）若多于5个（不包括5个）不足10个，则BHI接种5管，剩余的接种NA；
（3）5个及以下则全部接种BHI，不接种NA。
4、BP平板：36±1℃培养24h后观察，有菌落生长则取出，无菌落生长则继续培养至48h后再观察。若血平板已挑取菌落进行证实试验，则不必再挑取BP平板上的菌落进行实验。 若血平板上无菌落生长，则应在24h～48h内逐步观察BP平板是否长菌或有无长菌迹象，有则需配置BHI及NA，挑取BP上的菌落进行纯化、增菌，36±1℃培养24h。
5、血浆凝固酶试验：
（1）根据BHI管数，取冻干血浆粉，每瓶用移液枪加入0.5mL生理盐水，使其充分溶解，再换移液枪枪头取0.3mL BHI培养物加入其中（每管BHI用1个枪头），振荡摇匀后于36±1℃培养，计时，每30min观察一次，如呈现凝固（将试管倾斜或倒置时出现凝块）或半凝固（一般的液体呈现凝固）则判定为阳性。若一直不凝固，则一直观察，直至观察至6h（查看12次）还未凝固，则试验终止，判定为阴性结果；若中途出现完全凝固或半凝固，则试验终止，判定为阳性结果。
（2）同时取金黄色葡萄球菌标准菌株（ ATCC6538 以及 CMCC(B)26003 各一支 ）制成菌悬液后作为阳性对照、以灭菌生理盐水为阴性对照，分别接种至BHI中同步培养后进行血浆凝固酶试验。
（3）若血浆凝固酶试验结果可疑，则挑取NA上的菌落接种BHI再次进行试验。
第二法 金黄色葡萄球菌平板计数法
1、取1mL样品稀释匀液接种3个BP平板（此处并未严格按照标准中0.3mL、0.3mL、0.4mL精确取样，由于如此操作会增加试验时间，无法在15min内完成试验）。
2、涂布时不要触及平板边缘（会导致样液涂抹不均匀，大部分汇集于边缘）。
3、可用同一根涂布棒从低稀释度到高稀释度进行涂布（不用换涂布棒）。
4、涂布完成后应稍微放置一段时间使培养基吸收样品匀液。
5、若水珠较多，可正置于培养箱中1～2h后再倒置培养。
6、36±1℃培养24h后观察，有典型菌落生长则进行证实试验（革兰氏染色镜检、血浆凝固酶试验、划线血平板）。若无菌落生长则继续培养至48h后再观察，有典型菌落生长则进行证实试验，无典型菌落生长则试验终止。
第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数法
1、样品稀释同菌落总数，取3个连续稀释度稀释液（或包括液体样品原液），每个稀释度接种3管7.5%氯化钠肉汤管，每管接种1mL，36±1℃培养18h后观察，若出现浑浊则接种至BP平板，若无变化则继续培养至24h后再接种至BP平板。
2、划线接种至BP平板，36±1℃培养24h后观察，有典型菌落生长则进行证实试验（革兰氏染色镜检、血浆凝固酶试验、划线血平板）。若无菌落生长则继续培养至48h后再观察，有典型菌落生长则进行证实试验，无典型菌落生长则试验终止。
3、根据证实后的阳性管数差MPN表得出结果。
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