平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验介绍
发布时间：2023-08-23 浏览次数：532
细胞集落形成是检测培养细胞增殖能力的有效方法，通过计算集落形成率，来测定测试细胞的增殖能力。
实验前准备：6孔板、吸管、枪头、血球计数板、基质胶等放入超净工作台消毒30min。
1、平板集落形成实验(适用于贴壁细胞)
① 取出贴壁率 > 90%的细胞(处于对数生长期)，消化离心，重悬细胞并进行细胞计数。
② 6孔板种板：实验分组，每个孔中加入1000个细胞，放入CO2培养箱培养。
③ 培养1周后，当肉眼可见集落形成时，取出6孔板，弃除培养液，每孔加入2mL甲醇固定30min，弃除甲醇，每孔加入2mL 0.1%结晶紫染色3min，然后清洗掉结晶紫，数码相机拍照，光镜下计数集落
结果如下：
2、软琼脂集落形成实验(适用于悬浮细胞)
1. 收集对数生长期的细胞进行活细胞计数，然后调整细胞浓度，用含20%FBS的DMEM制成1000活细胞/ml的细胞悬液。
2. 用蒸馏水制备1.2%、0.7%两个浓度的低熔点琼脂糖，高压灭菌后，维持在40℃不会凝固；
3. 1.2%琼脂糖和2xDMEM等体积混合，6孔板中加入1.4ml，RT凝固作为底层琼脂，置CO2温箱中备用；
4. 0.7%琼脂糖和2xDMEM等体积混合，再加入细胞悬液充分混匀，RT凝固作为上层琼脂，勿有气泡，将实验组和对照组分两组加好，盖上盖并作好标记。在室温放置20分钟使细胞琼脂悬液凝固。
5. 然后移培养板或平皿于CO2培养箱中37℃进行培养。
6. 培养7～10天，肉眼观察并计数细胞集落。
结果：
以肉眼可见的细胞团作为计数集落的标准。集落的计数和计算：集落数=n孔中细胞集落数总和/n孔，
集落形成率 = 集落数/接种培养细胞总数×100%
结果如下:
来源：“YuJinBio誉津医学”公众号，作者~Lisa。
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