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RAW 264.7细胞培养,小鼠单核巨噬细胞白血病细胞培养攻略

发布时间:2023-11-08    浏览次数:1368

RAW 264.7,小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,来源于雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤,是常用的炎症细胞模型之一,常见于研究细胞吞噬、细胞免疫、分子免疫学。

RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

RAW264.7 属单核细胞/巨噬细胞系,具有松散贴壁的短梭形细胞和圆形活细胞。细胞常用DMEM培养基,含10%优质胎牛血清,一般2-3天传代一次,推荐传代比例1:3-1:4,但RAW264.7在培养过程中容易出现细胞形态改变(长出伪足)、消化困难、生长缓慢等问题,需要我们特别注意以下几点:


1. RAW 264.7 因其具有较强的吞噬能力,吞噬后释放的趋化因子可促使细胞分化出伪足,粘附攀爬能力增强。若细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣,会促使细胞形态改变成多角形且面积增大,时常有较长的黑色触角,导致细胞消化困难,因此要尽量避免细胞发生形态改变。即在接种细胞时保持一个适中的传代密度,避免其向终末细胞分化。


2. RAW264.7喜欢连片生长,低密度下一片一片分布在培养皿中且不相连接,高密度下才会连成大片且可能叠加成层,导致部分细胞漂浮无法贴壁,因此,培养时要密切关注细胞汇合度,控制细胞生长速度,不可等到叠加成层才传代。

3. RAW264.7传代后贴壁较短,约半小时即可贴壁,细胞呈圆形,折光度很好,生长一段时间后,部分细胞会变成类似四角形,伸出伪足之类。此时必须传代,无论汇合度如何都需要进行传代,避免细胞形态进一步发生改变。

4. RAW264.7不能用胰酶消化,推荐吹打传代。分化的细胞贴壁牢固,传代的时候千万不要强制性吹下这些细胞,只接种容易吹下的那些未分化细胞;吹打的力度一定要轻,切勿暴力吹打;推荐使用巴氏管吹打;亦可在液体环境下用细胞刮刀将细胞刮下来。

5. 细胞培养时无法保证100% 不分化,但通过传代可以更好地控制细胞分化率。

6. RAW264.7在不同生长密度下细胞形态不同,若复苏密度太高,细胞增殖过快,会加剧细胞的营养缺失,加速细胞老化;若复苏密度太低,细胞生长缓慢,推荐采用直径6cm的培养皿复苏细胞,细胞数量控制在1.0×10^6~1.5×10^6个。

7. 细胞刚接种有少量短触角,属于正常现象,如果出现胞体变大,突触伸长可以已经发生了分化。对于轻微分化细胞,可以轻吹起部分细胞,更换培养环境后进行调整。

RAW 264.7培养注意事项:

      1. RAW 264.7 容易发生形态变化,在接种细胞时务必保持适中的传代密度,避免其向终末细胞分化;

      2. RAW264.7喜欢连片生长,在不同生长密度下细胞形态不同,高密度下细胞容易漂浮,因此密切关注细胞汇合度,及时传代;

      3. RAW264.7不能用胰酶消化,推荐吹打传代,亦可在液体环境下用细胞刮刀将细胞刮下来;

      4. 细胞刚接种有少量短触角,属于正常现象,如果出现胞体变大,突触伸长可能已经发生了分化。对于轻微分化细胞,可以轻吹起部分细胞,更换培养环境后进行调整,或者尽快传代,避免形态进一步改变。

细胞培养基

文章来源:“丰晖生物公众号,作者~。
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