PDRN如何参与增强细胞增殖人类皮肤成纤维细胞
发布时间：2023-12-14 浏览次数：198
众所周知，核苷酸、核苷和嘌呤/嘧啶碱基在体外促进细胞增殖。然而，这种有丝分裂活性的分子机制仍存在争议，因为据报道这些化合物既与生长因子协同，又直接作用于嘌呤能受体本身诱导增殖反应；
多聚脱氧核糖核苷酸(PDRN)和腺苷能够增加人皮肤成纤维细胞在原代培养中的生长速率。在微荧光研究中，我们观察到PDRN和腺苷增加了胞质钙离子的浓度。我们的研究结果表明，PDRN可能作为一种前药物，为培养细胞提供可检测数量的有丝分裂脱氧核糖核苷酸、脱氧核糖核苷和碱基；
此外，PDRN诱导的细胞增殖增强似乎部分是由A2A嘌呤受体的激活介导的。
实验证实
为了研究PDRN刺激成纤维细胞增殖的机制，我们评估了它在原代培养中对人类皮肤成纤维细胞生长的影响，以及嘌呤受体在这种现象中的参与：我们重点关注了A2A嘌呤受体的作用，作为这种亚型，被报道是最有可能的刺激细胞增殖的介质；
此外，我们还研究了钙作为第二信使的作用，参与了 PDRN 对有丝分裂刺激的转导。
实验方式
（1）人类皮肤成纤维细胞来自7个不同的受试者，年龄在18岁到39岁之间。在分离程序后，成纤维细胞在加湿的培养箱中保持在37°C。5%的CO2培养基为杜尔贝科改良鹰培养基 (DMEM)杂交克隆，添加 10%胎牛血清特征化海克隆(FBS)、2nM谷氨酰胺、100 u/ml 青霉素、lOOUg链霉素；
（2）MTT检测：成纤维细胞被镀在24个多孔(Falcon)上，每孔密度15000，DMEM中添加10%胎牛血清；细胞附着3,4小时，然后剥夺血清。饥饿72h后，用含有 1%胎牛血清的 DMEM培养基喂养成纤维细胞进行增殖实验；每天更换培养基，整个实验期间都有药物。MTT检测细胞活力。简单地说，细胞被孵育 4小时。用0.25 mg/ml 3(4,5 二甲基酸 2ol-2-yl)-2,5，二苯四溴铵(MTT)在无血清培养基中，37°C。在活细胞中，线粒体将MTT还原为一种蓝色晶体的晶体。用二甲基亚砜求解氟烷，评估细胞活力。
实验结果
图1显示了人皮肤成纤维细胞增殖的时间过程，无论是在没有或存在 10 卩 g/ml PDRN 的情况下， 使用 MTT 试验进行评估。数值代表了 7 个不同实验的平均值，这些实验是使用从不同受试者获 得的成纤维细胞原代培养独立进行的。与未处理的对照组相比，PDRN 处理的细胞的生长速率显 著提高。这种效应在增殖 48 小时后已经显著，并持续了整个实验的持续时间。
当实验在含有低比例胎牛血清（1%）的培养基中进行时，可以观察到 PDRN 诱导的成纤维细胞生长的增加。
未经处理或暴露于 10 gg/ml PDRN 的人皮肤成纤维细胞的增殖模式。DMEM 1%胎牛血清每日改变，每天添加 PDRN。增殖试验分别在 12、24、48、72、96、186h 后进行。在脱位长12小时后获得的数据被认为是基础值，每个值都以基础值的百分比表示。数据代表了7个exp的平均±SEM。一式四份地*p<0.05 和**p<0.01vs.基础值。
实验补充
PDRN增强的细胞增殖表现出浓度依赖性的反应。处理2天后评价细胞活力，PDRN的营养效应lOOpg/ml 时达到最大值（图 2）。当PDRN浓度达到500时，较高浓度的PDRN诱导的增殖效应较小，细胞生长减少（数据未显示）。
实验总结
总之，在实验模型中，我们提出PDRN可以刺激原代培养的人皮肤成纤维细胞的增殖，并激活A2嘌呤能受体似乎在这一现象中发挥着重要的作用，尽管不是排他性的。PDRN可以释放广泛的嘌呤和嘧啶化合物，在几乎所有嘌呤受体上共享活性。自A2受体亚型可以刺激细胞增殖和组织修复，实验数据进一步证明，在需要更有效的细胞增殖和组织修复时，使用PDRN作为治疗药物。
参考文献：
POLYDEOXYRIBONUCLEOTIDES ENHANCE THE PROLIFERATION
OF HUMAN SKIN FIBROBLASTS: INVOLVEMENT
OF A, PURINERGIC RECEPTOR SUBTYPES
Stefano Thellung , Tullio Florio, Albert0 Maragliano, Giulia Cattarini and Germaro Schettini
Institute of Pharmacology, School of Medicine, University of Genova; Service of Pharmacology,
National Institute for Cancer Research of Genova (IST); Unit of Neuroscience, Advanced
13iotechnology Center of Genova (CBA) L.go R. Benzi lo,16132 Genova
(Received in final form January 29,1999)
来源：环凯转载于“PDRN研究所”公众号，作者 — 小P所长 ；
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