GB 4789.40-2024克罗诺杆菌检验标准变更汇总
发布时间：2024-08-30 浏览次数：132
GB4789.40-2024《食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺检验》于2024年2月8日发布，将于2024年8月8日正式实施。关于克罗诺杆菌检验2024版与2016版标准比对，小编为大家整理好了，以供大家参考。
一、新标准重点变化解析
1、修改了名称
旧标准名称为《食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验》。
2、适用范围增加了婴幼儿辅助食品
标准适用范围新增婴幼儿辅助食品，即新标准适用于婴幼儿配方食品、婴幼儿辅助食品、乳及乳制品及其原料中克罗诺杆菌的检验。
有相关研究表明克罗诺杆菌从部分乳粉、谷类、淀粉制品，果蝇中都有检出，结合克罗诺杆菌的致病性和临床上的易感人群，发现克罗诺杆菌感染病例大多是婴幼儿，所以婴幼儿辅助食品与婴幼儿配方食品、乳及乳制品等具有潜在风险，因此需要补充此类别。
3、增加了PCR鉴定方法作为选做内容
增加PCR鉴定方法选做项目。可减少工作量，节省检测时间，能够满足可疑菌落的高通量筛选的需求。因此在本次修订也增加了“PCR鉴定方法作为选做内容”的修改。
4、删除了挑取黄色菌落和生化鉴定中的产黄色素和苦杏仁苷项目
研究表明部分克罗诺杆菌不产黄色素，TSA上产黄色素作为鉴定的关键步骤可能会造成漏检，且产黄色项目在ISO 22964-2017已被取消，因此在新版标准中将该生化鉴定中“产黄色素项目”删除。
5、修改了预热、选择性增菌温度以及TSA平板的培养温度和时间
BPW的预热温度由44℃调至41℃±1℃，mLST-Vm 增菌液培养温度由“44℃±0.5℃变更为“41.5℃±1℃”。旧标准采用44℃的选择性增菌温度，该温度与ISO 22964-2006相同，但是44℃在国际上存在争议，该温度被认为会对乳粉等食品中损伤的细菌有一定抑制作用，从而导致漏检。ISO22964-2017标准也已将此温度下调至41.5±1℃，本着尽量不损伤受伤细胞，提高检出率的原则，因此新标准相应做了改变。
同时将TSA平板的培养温度和时间由25℃±1℃培养48h±2h修改为36℃±1℃培养24h±2h。
ISO 22964-2017中分离平板TSA是36℃±2℃培养21h±3h，FDA方法中的TSA也是36℃培养18-24小时，此处与国际方法一致，缩短了检验周期。
6、TSA纯化5个单菌落平板后，鉴定菌的数量不定
旧标准中要求在阪崎肠杆菌显色培养基上挑选5个可疑菌落进行生化鉴定；而新标准中则在克罗诺杆菌显色培养基上挑选5个可疑菌落后，可以选择最具特征的菌落进行生化鉴定，如果挑中的第一个鉴定后为阳性，则后续4个都可以不做生化鉴定了，如果为阴性，则继续挑选其他剩余菌落进行鉴定，直至全部为阴性或发现阳性菌落为止。因此，新标准中，菌落鉴定的数量可以是1~5个不等。
7、删除了挑取黄色菌落和生化鉴定中的产黄色素的项目
有文献报道：部分克罗诺杆菌在TSA上不产黄色素，仅依靠TSA上产黄色素来作为是否进行生化鉴定的依据会造成漏检，目前在ISO22964-2017也被取消 。
8、删除苦杏仁苷生化反应
目前国际上已不再使用该生化反应用于克罗诺杆菌鉴定，而删除该反应也不影响该菌的判定，因此在本次修订中将生化鉴定中的“苦杏仁苷项目”删除。
9、修改了培养基pH调节方法
在旧标准中，各类培养基要求高压灭菌之前调节至相应范围，新标准则注重灭菌后的培养基pH值，改为“灭菌后的培养基25℃时”pH值应在相应范围。
10、修改了氨基酸培养基的制备
新标准附录A ，L-赖氨酸脱羧酶培养基和L-鸟氨酸脱羧酶培养基的制备中要求在121 ℃高压灭菌前，新增操作“在上面滴加一层液体石蜡”。
二、克罗诺杆菌检验方法GB、BAM、ISO检验方法差异比对：
| GB、BAM、ISO检验方法差异比对 | ||||
| 方法来源 | GB4789.40-2016 | GB4789.40-2024 | BAM | ISO22964-2017(定性) |
| 取样量 | 定性：100g | 定性：100g | 定性：100g | 10g/10mL+90mLBPW |
| 定量：100g、10g、1g | 定量：100g、10g、1g | 定量：100g、10g、1g | ||
| 增菌 | BPW（预热44℃）预增菌 | BPW（预热41℃）预增菌 | BPW预增菌 | BPW预增菌 |
| mLST-Vm选择性增菌 | mLST-Vm选择性增菌 | CSB选择性增菌 | ||
| 培养条件 | BPW：36℃±1℃培养18h±2h | BPW：36℃±1℃培养18h±2h | 36℃±1℃培养24h±2h | BPW：34℃-38℃培养18h±2h |
| mLST：44℃+0.5℃培养24h+2h | mLST：41.5℃±1℃培养24h+2h | CSB：41.5℃±1℃培养24h±2h | ||
| 分离培养 | 阪崎肠杆菌显色培养基 | 克罗诺杆菌显色培养基 | DFI和R&F琼脂 | CCI琼脂 |
| 计数方法 | MPN | MPN | MPN | 无 |
| 确证实验 | TSA平板产黄色素、氧化酶阴性、L-赖氨酸脱羧酶阴性、L-鸟氨酸脱羧酶阳性、L-精氨酸双水解酶阳性、柠檬酸水解阳性、D-山梨醇阴性、L-鼠李糖阳性、D-蔗糖阳性、D-蜜二糖阳性、苦杏仁苷阳性 | TSA平板产黄色素、氧化酶阴性、L-赖氨酸脱羧酶阴性、L-鸟氨酸脱羧酶阳性、L-精氨酸双水解酶阳性、柠檬酸水解阳性、D-山梨醇阴性、L-鼠李糖阳性、D-蔗糖阳性、D-蜜二糖阳性、苦杏仁苷阳性 | VITEK2.0或RapidID32E | 氧化酶、4-硝基苯基a-D吡喃葡萄糖苷底物、L-赖氨酸脱羧酶、L-鸟氨酸脱羧酶、甲基红(可选)、VP(可选) 发酵：D-阿拉伯糖醇、D-山梨醇、D-蔗糖、a-甲基-D-葡萄糖苷阳性(可选) |
| 分子方法 | 无 | PCR | PCR | 无 |
来源：“ 食品微生物检测”公众号；作者~ hhy。
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