细菌的鞭毛染色
发布时间：2025-05-19 浏览次数：83
细菌的鞭毛染色，本应该在细菌染色方法中，但鞭毛染色技术是细菌鉴定的难点，所以摘出来单独讲解。
鞭毛是细菌的运动器官，通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一。
细菌鞭毛比较细且很脆，很容易脱落，尤其是衰老的细胞鞭毛更容易脱落，所以，观察鞭毛尽量选择年幼的细菌。
1、实验原理
细菌的鞭毛很细，需要先用媒染剂进行处理，使媒染剂沉积在鞭毛表面，这样鞭毛就可以变粗，继续进行染色后，就可以观察清楚鞭毛。鞭毛染色的方法比较多，现在学习一种，既容易观察又容易操作的染色方法——镀银染色法。
1958年，Rhodes根据Fontana的螺旋体改良镀银染色法，建立了一种细菌鞭毛镀银染色法，试剂分为媒染剂A液和银染剂B液。该染色法的优点是采用氨银染色液作为核心染料，试剂比较灵敏，操作简单，结果判断可靠。
2、染液的配制
媒染液A液：10%单宁酸10mL加5mL饱和硫酸钾铝水溶液，再加1mL苯胺饱和水溶液形成沉淀，通过摇动又能重新溶解，加入5%FeCl3水溶液1mL形成黑色溶液，稳定10min后使用。
银染液B液：配制5%AgNO3水溶液100mL，取出其中10mL备用，再缓慢加入浓氨水（比重0.88）使形成的沉淀刚好重新溶解，最后把备用的10mLAgNO3溶液向其中逐滴加入，直到摇动后呈现轻微而稳定的薄雾状溶液为止，避光保存，可稳定数周。
3、应用
通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一，根据鞭毛的这些特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。
4、操作步骤
（1）固定：取一片干净的载玻片，在载玻片中央滴加少许蒸馏水，用接种环蘸取少量菌液，与蒸馏水混匀，自然晾干；
（2）初染：滴加一滴A液，使染液均匀地覆盖到整个菌面，染色5min；
（3）冲洗：用洗瓶轻轻冲洗；
（4）复染：轻轻滴加几滴B液冲去残余的水分，再用B液进行复染，约30s至1min。
（5）冲洗：当涂片出现明显的褐色时，立即用蒸馏水或去离子水充分冲洗。
（6）干燥：自然晾干；
（7）镜检：鞭毛较细，要用油镜观察。
5、注意事项
（1）鞭毛染色过程中，不能使用自来水冲洗，这一点跟前面有所不同；
（2）操作过程，动作要轻，不能破坏鞭毛的结构；
（3）涂片只能自然晾干；
（4）选择年幼菌种。
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