《GB 4789.12-2025产肉毒毒素梭菌及肉毒毒素检验》解读
发布时间：2025-11-12 浏览次数：57
微生物学检验标准的更新是食品安全领域风险控制的关键环节。近期我国陆续发布了多项食品安全的新标准，其中包括了《GB4789.12-2025 产肉毒毒素梭菌及肉毒毒素检验》。本标准与 GB4789.30—2016相比，主要变化如下：
— 修改了标准名称;
— 增加了术语和定义；
— 修改了范围；
— 增加了梭菌实时荧光PCR鉴定方法；
— 修改了设备和材料、培养基和试剂；
— 修改了检验程序、操作步骤、结果与报告及附录。
修改了标准名称、范围，增加“产肉毒毒素梭菌”的术语定义
标准名称修订：由《食品安全国家标准 食品微生物学检验 肉毒梭菌及肉毒毒素检验》变更为《食品安全国家标准 食品微生物学检验 产肉毒毒素梭菌及肉毒毒素检验》。
范围修订：2016版标准适用于“肉毒梭菌”的检验；2025版标准适用于“产肉毒毒素梭菌”的检验。
新增术语定义“产肉毒毒素梭菌”：革兰氏阳性厌氧杆菌，能形成卵圆形芽孢，一般芽孢会大于菌体、位于次端,在适宜培养条件下能产生肉毒毒素的一类细菌的统称。包含肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)等。
技术意义：由于近年来发现，除肉毒梭菌外，其他梭菌，如E型丁酸梭菌等也可产生肉毒毒素， 并引发食源性肉毒中毒，因此，名称修改后标准适用性范围覆盖肉毒梭菌、丁酸梭菌等产肉毒毒素梭菌检验，更科学更精准。
增加了梭菌实时荧光PCR鉴定方法
变更内容
2025版标准进一步“增加了梭菌实时荧光PCR鉴定方法”，并在普通PCR部分提供了更详细的基因序列位置信息（GenBank编号）。
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技术意义
根据不同梭菌的全基因组序列，建立了梭菌属水平、肉毒梭菌和丁酸梭菌种水平鉴定用荧光PCR方法，实现了对“产肉毒毒素梭菌”的精准菌种鉴定。
针对毒素基因分型检测，可使用环凯肉毒梭菌A/B型毒素基因PCR检测试剂盒（KJD06P）和肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR检测试剂盒（KJD07P）。
培养基和试剂的修改
变更内容
新增生理盐水。
新增哥伦比亚血琼脂培养基。
修改“10%胰蛋白酶溶液”改为“胰蛋白酶：1：250 或 0.25%。
新增10×TAE缓冲液。
技术意义：哥伦比亚血平板结合卵黄琼脂，提高了对各类“产肉毒毒素梭菌”的分离成功率，增强了方法的可靠性。
推荐环凯明胶磷酸盐缓冲液（027143）或其即用成品（C27143D1）、TPGYT培养基基础（027147）或TPGYT肉汤管（C27147G1）、即用型庖肉培养基（含铁粉）（C27140G2）、哥伦比亚血平板 （CP0160）、厌氧卵黄琼脂基础（027165）+50%卵黄乳液（029250）。
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庖肉培养基（含铁粉）（C27140G2） | TPGYT肉汤管不含胰酶（C27147G1） | 哥伦比亚血平板（CP0160） |
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厌氧卵黄琼脂基础（027165） | + 50%卵黄乳液（029250） | 厌氧培养相关产品 |
检验程序与操作步骤的变化
变更内容
流程图将固态、半固态、液体样品的肉毒素检验方法合并。
调整了疱肉培养基、卵黄琼脂平板的培养温度从35℃±1℃调整为36℃±1℃，并将疱肉培养基、TPGYT的培养时间在5d培养后培养基无菌生长应延长培养至10d体现在了流程图中。
新增哥伦比亚血琼脂，用于观察肉毒梭菌的菌落形态。
新标准中革兰氏染色和PCR毒素编码基因检测后再进行肉毒素检验和实时荧光PCR，提升检验的精确度，将产肉毒素的梭菌精确到梭菌属和种，不再局限于肉毒梭菌。
技术意义：不同形态的样品检测方法合并后，操作方法更为灵活；培养条件36℃±1℃与其他国家标准的微生物培养温度更为统一。
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结果与报告的
修订：2016版“肉毒梭菌检验结果报告”修订为2025版“产肉毒毒素梭菌检验结果报告”，需报告样品中未检出或检出产某型肉毒毒素的某种梭菌，如：样品中检出产E型肉毒毒素的丁酸梭菌。
技术意义：新增报告不仅能确认样品中是否存在肉毒毒素风险，还能明确产生该毒素的具体菌种和毒素型别，提升溯源价值。
总 结
本次修订将标准名称修改为“产肉毒毒素梭菌及肉毒毒素检验”，通过增加培养基和不同琼脂培养基上的菌落形态描述等，可实现对产肉毒素的肉毒梭菌和丁酸梭菌的有效检出。
同时，增加了分离菌鉴定用荧光PCR方法，可快速对可疑菌落进行鉴别。通过上述一系列技术内容的修订，该标准不再仅适用于食品中肉毒梭菌和肉毒毒素检验，而是适用于多种产肉毒毒素梭菌和肉毒毒素的检验。
该标准可提高食品中产肉毒毒素梭菌及肉毒毒素的检出能力，为高风险食品中产肉毒毒素梭菌及肉毒毒素的风险监测和评估等风险防控工作提供有力技术支撑。
附录：GB 4789.12-2025 标准检验流程环凯配套产品速查表
