最近浏览
-
FZ028BF2 诺如病毒GI/GII核酸检测试剂盒(RT-PCR探针法，含MS2) 48test
编号：FZ028BF2
规格：48 测试/盒
-
C27160B2 卵黄琼脂平板(梭菌) 90mm×20个
编号：C27160B2
规格：90mm×20个/盒
-
增菌培养基【胰酪大豆胨液体培养基(TSB)】
编号：CP4048Gn(n=1、2、3...)、CP4048Pn((n=1、2、3...)
规格：7.5ml/10ml/15ml/40ml/100ml/200ml/250ml/500ml
-
CP4064P1 哥伦比亚琼脂平板(含庆大霉素) 90mm×20个
编号：CP4064P1
规格：90mm×20个/盒
产品名称：诺如病毒GI/GII核酸检测试剂盒（RT-PCR探针法，含MS2）
英文名称：Norovirus (GI/GII) Real Time RT-PCR Kit (with MS2)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
|---|---|
| FZ028BF2 | 48 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒适用于贝类，硬质食品表面，软质水果以及水中诺如病毒的定性检测，不可用于临床诊断。
检测原理：本试剂盒采用一步法实时荧光RT-PCR技术，针对诺如病毒GI/GII型特异性基因序列设计高灵敏度引物及探针。在PCR扩增过程中，探针与靶标基因结合后被Taq酶水解，释放荧光信号。荧光定量PCR仪实时监测FAM（GI型）、VIC（GII型）及ROX（MS2噬菌体内标）三个荧光通道的扩增曲线，通过对数期荧光信号的动态变化实现诺如病毒核酸的定性检测，并同步监控实验有效性。
诺如病毒GI/GII核酸检测试剂盒(RT-PCR探针法，含MS2)产品组分：
注1：预混合液含有引物和探针等反应成分，不含ROX；本试剂盒不含病毒富集试剂及RNA提取试剂。
注2：空白对照为RNase-free ddH2O；阳性对照为含有检测基因的DNA片段；阴性对照为阴性样本提取的RNA，不提供。
储存条件与保质期：-20℃避光储存，避免反复冻融。有效期为12个月，生产日期见外包装。
灵敏度：最低检验限达到10-100 copies/Test
所需其他材料和适用仪器：本试剂盒适用于ABI系列、Bio-Rad系列等实时荧光定量PCR仪（具有能够检测FAM、VIC和ROX标记的荧光通道）。
诺如病毒GI/GII核酸检测试剂盒(RT-PCR探针法，含MS2)检测方法：
1，病毒富集：贝类，硬质表面食品，软质水果等样品可参照《GB4789.42-2025 食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》，水样品可参照《ISO 15216-2 2019 Microbiology of the food chain Horizontal method for determination of hepatitis A virus and norovirus using real-time RT-PCR》。
2, 样本制备及RNA提取：样品按照病毒RNA提取试剂盒相应要求和步骤提取，也可手工提取和纯化或使用自动化的提取仪器。
3, 反应体系配置
从试剂盒中取出预混合液和酶混合液，充分融化，轻微振荡混匀，瞬时离心。
按照下表等比例配置反应体系，预混液20 μL置于PCR管或PCR板中，然后将空白对照、样品RNA提取液、阳性对照各取5 μL分别加入PCR管或PCR板中，盖好管盖或板膜，短暂离心后立即进行PCR扩增反应。
4, PCR扩增：PCR管或PCR板置于PCR仪器上，推荐反应程序设定如下：反应体系25 μL，在第三步每个循环60℃时检测荧光信号，检测通道选择FAM、VIC和ROX。
注：使用ABI系列PCR仪器，如果不添加ROX，“passive reference”和“quencher”均选择“none”。
5、标准曲线绘制：绝大多数PCR仪都能够自动生成标准曲线，如未生成，可以未稀释和梯度稀释的MS2过程控制的浓度lg值为X轴（设过程控制病毒原液浓度为1），以其Ct值（部分PCR仪显示为Cq）为Y轴，绘制过程控制标准曲线。
6、质量控制
满足以下条件本次检测有效：
1）空白对照和阴性对照无扩增曲线；
2）MS2过程控制在相应的检测通道有S型扩增曲线且标准曲线R2≥0.98；
3）阳性对照（GI过程控制和GII过程控制）在相应的检测通道有S型扩增曲线；
4）提取效率≥1%；
5）抑制指数<2.0。
注1：如果对照满足质量控制要求，提取效率与抑制指数不满足质量控制要求，检测结果为阳性时也可酌情判定为阳性。
注2：如果除空白和阴性对照外，其他对照满足质量控制要求，提取效率与抑制指数也满足质量控制要求，检测结果为阴性时也可酌情判定为阴性。
注3：设样本经过前处理后获得的病毒富集液总体积为V1，从V1中取出进行RNA提取的体积为V2，最终溶解或洗脱RNA时使用的液体体积为V3。将MS2初始浓度设为1，假设样本原液外加扩增控制的抑制指数小于2，实际样本检测时MS2的Ct值在标准曲线上对应的浓度为C（如果仪器未生成标准曲线，需将Ct值带入绘制的标准曲线计算对应浓度的lg值），则提取效率=（C×V1×V3）/（10×V2×1）×100%。
7、结果分析及判定：在检测有效的情况下，如下表进行判定，其中FAM通道为诺如病毒GI检测结果，VIC通道为诺如病毒GII检测结果，ROX通道为MS2过程控制检测结果。
