产品名称：Top10 Competent Cell
中文名称：top10感受态细胞
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKV209-01A | Top10 Competent Cell | 100μl×10支 | 感受态细胞 | 281 |
产品描述：本产品是采用大肠杆菌 TOP10 菌株经特殊工艺制作得到的感受态细胞，可用于 DNA 的化学转化。TOP10 是一种常用于质粒克隆的菌株，其 φ80, lacZΔM15 基因产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现 α 互补，可用于蓝白斑筛选。该产品适用于高效的质粒 DNA 克隆，并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
产品特点：
适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增。
φ80, lacZΔM15 基因的产物可与 pUC 载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现 α 互补，可用于蓝白斑筛选。
基因型：F-, mcrA Δ(mrr-hsd RMS-mcr BC) φ80, lacZΔM15, Δlac X74, recA1 araΔ139Δ(ara-leu) 7697, galU galK,rps, L (Strr) endA1, nupG。
转化效率：使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 108 cfu/μg DNA。
保存温度：-70℃
Top10 Competent Cell 产品包装（A包装）：
| 产品组成 | 体积 |
| TOP10 Competent Cell | 100μl×10 |
| Control DNA pUC19（1ng/μl） | 10μl |
操作方法：
1）取感受态细胞置于冰浴中，一次转化感受态细胞的用量为 50-100μl，可根据实际情况分装使用。所用 DNA 的体积不要超过感受态细胞的十分之一，以下实验以 100μl 感受态细胞为例。
2）待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（通常 100μl 感受态细胞能够被1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液枪吹打混合，冰上放置 30 分钟。
3）将离心管置于 42℃水浴中，热击 60-90 秒，迅速将离心管置于冰上，放置 2-3 分钟。
4）向每个离心管中加入 500μl 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培养基中，37℃摇床，150rpm 振荡培养 45 分钟，使质粒上相关抗性基因表达，菌体复苏。
5）吸取 200μl 已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 LB 或 SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全吸收，倒置培养 12-16 小时。涂布量应根据具体实验调整，如果转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板，如果预计的克隆数较少，可 3000rpm 离心 5 分钟，吸取部分培养基，悬浮菌体后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存，如果第二日转化菌落数过少，可以将剩余菌液再涂布在新的平板上。
注意事项：
1）感受态细胞应保存于-70℃冰箱中，不可反复冻融，或放置时间过长，避免感受态转化效率降低。
2）实验操作时，应注意无菌条件。
3）实验过程中，可保留部分连接反应液，当转化不成功时，可重新转化。
