2025 药典微生物限度检查：法定方法的确认要点（精密度 / 专属性是否必做？）
发布时间：2026-03-02 浏览次数：131
2025 年版《中国药典》中，法定微生物限度检查方法（如通则 1105、1106）需做方法确认，而非完整方法验证；确认需覆盖专属性、准确度、精密度、检测限等核心参数，但要求较验证简化，可结合方法适用性试验同步完成。
一、核心概念与适用场景
方法验证（Validation）：针对新开发方法、修订方法或超出预定范围使用的法定方法，目的是证明方法本身适合检测要求，需全面验证性能参数。
方法确认（Verification）：针对首次使用的法定方法（含修订版），目的是证实实验室有能力使用该方法，且方法适用于被测样品，无需完整再验证，按风险评估选择参数。
方法适用性试验：1105/1106 通则中的强制性要求，是方法确认的核心环节，验证供试品基质不干扰检测、试验菌可正常检出。
二、法定方法确认的必做参数（按 9213 指导原则）
| 参数 | 要求与简化要点 | 适用场景 |
| 专属性 | 做包容性 + 排他性测试：目标菌（检测限 10 倍）全检出；非目标菌（接种量≥目标菌 10 倍）不检出；菌种选择可简化（无需 20 株） | 计数 / 控制菌检查均需 |
| 准确度（定量） | 用回收率评估，范围 0.5～2.0；与方法适用性试验的回收率要求一致 | 微生物计数法 |
| 精密度（定量） | 考察中间精密度：不同人员 / 日期两次测定，低中高 3 浓度各≥10 次重复；两次平均值差值≤0.5 lg | 微生物计数法 |
| 检测限（定性） | 20 次重复测试（目标菌浓度≈检测限）；阳性检出率≈50%；实验室确认检测限≤法定方法 3 倍 | 控制菌检查法 |
| 促生长能力 | 确认培养基 / 培养体系能支持目标菌生长，与培养基适用性检查同步完成 | 所有微生物检查 |
三、实操边界与误区
不是 “全做或全不做”：按样品风险（如抑菌性、复杂基质）与实验室能力评估，可简化但不能省略关键参数。
与适用性试验整合：无需重复实验，在适用性试验中加入精密度考察（如多批次平行测试）、专属性扩展（加非目标菌干扰）即可满足确认要求。
超范围使用需验证：如改变样品前处理、培养条件或检测限值，属超出法定方法预定范围，需按验证要求做全面评估。
修订版法定方法：需重新确认，重点评估修订内容对检测结果的影响。
四、实操步骤（以 1105 微生物计数法为例）
先做培养基适用性检查，确认促生长与选择性合格。
方法适用性试验：加 10～100 CFU 试验菌，回收率 0.5～2.0，证实无基质干扰。
补充确认：记录与报告：整合适用性试验与确认数据，形成确认报告，留存至方法变更或停用。
五、总结与合规建议
法定方法需做确认 + 适用性试验，核心参数（专属性、准确度 / 回收率、精密度、检测限）不能省，可按风险简化流程。
日常检验中，若样品组分、检验程序变化可能影响结果，需重新确认并同步更新适用性试验数据。
可将确认与适用性试验合并方案，减少重复操作，同时满足 9213 指导原则与 1105/1106 通则要求。
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