临床微生物鉴定中血平板血源选择、溶血判定与质量控制要点解析
发布时间：2026-05-21 浏览次数：14
在微生物鉴定与培养的漫长历史中，血平板（Blood Agar Plate, BAP）始终占据着无可替代的地位。它不仅是支持各种苛求菌生长的“全能型营养基”，更是通过溶血反应进行表型鉴定的关键工具。
然而，血平板的技术门槛远高于普通培养基——它包含活性生物成分，其生产、保存与使用中的每一个细节，都直接影响检测结果的可靠性。
本文将系统解析血平板的血源选择、分类原理、溶血判定以及质量控制关键点。
一、血液来源：生物学差异与选择策略
血液是血平板的灵魂。不同动物来源的红细胞在膜结构、营养成分及溶血反应表现上存在显著差异。
脱纤维绵羊血 (Defibrinated Sheep Blood)
地位： 临床微生物鉴定与药典（ChP/USP/EP）实验的金标准。
优势： 绵羊红细胞膜的张力最利于观察溶血环，溶血环边界清晰；对链球菌属（Streptococcus）的 α / β 溶血表现最典型；批间差异小，利于标准化比较。
注意： 绵羊血中含有天然抑制因子，可能轻度影响某些嗜血杆菌生长。
推荐浓度：通常加入量为5%~10%。
脱纤维马血 (Defibrinated Horse Blood)
特点： 富含 X 因子（Hemin）和 V 因子（NAD）、对某些苛求菌支持能力较强。
应用： 在某些地区用于特殊嗜血杆菌培养、常用于巧克力培养基制备。
局限性：某些链球菌溶血界限不如羊血清晰；可能出现类似“假溶血”现在。
脱纤维兔血 (Defibrinated Rabbit Blood)
对部分特定病原菌支持良好
多用于科研用途
成本与供应稳定性限制了其常规应用
为什么必须使用“脱纤维”血？
关键原因在于——避免化学抗凝带来的干扰。
为了防止血液凝固，通常会使用化学抗凝剂（如 EDTA、柠檬酸钠），但它们对细菌鉴定有极大的副作用：
- 螯合金属离子
- 改变培养基pH值
- 抑制溶血素活性
- 干扰微生物生长
脱纤维工艺采用物理搅拌去除纤维蛋白原，既保持红细胞完整性，又避免化学干扰，是血平板生产的标准方式。
二、血平板的分类及核心原理
根据基础培养基的营养梯度及处理工艺，血平板可细分为多个专业品种：
1、基础血平板（Standard Blood Agar, BAP）
常见基础为：TSA（胰酪大豆胨琼脂）、营养琼脂、哥伦比亚琼脂基础；再加入 5% 脱纤维羊血制成。
核心功能：
- 支持多数需氧与兼性厌氧菌生长
- 通过 α / β / γ 溶血进行初步鉴别
2、哥伦比亚血平板 (Columbia Blood Agar)
采用高营养复合蛋白胨体系：
- 菌落更饱满
- 溶血更清晰
- 适用于临床复杂样本初筛
3、巧克力平板 (Chocolate Agar)
虽然名字叫巧克力，但其实不含巧克力，而是“煮熟的血平板”。
工艺关键：在加入血液后控制加热，使红细胞裂解（通常 70–80℃范围内工艺控制）。
作用机理：高温促使红细胞裂解
- 释放胞内 Hemin（X 因子）
- 释放 NAD（V 因子）
- 灭活 NAD 酶
应用菌：
- Neisseria 属（奈瑟氏菌）
- Haemophilus 属（嗜血杆菌）
4、厌氧血平板 (Anaerobic Blood Agar)
在血平板基础上加入：维生素 K₁、氯化血红素Hemin。
用于培养专性厌氧菌（如 拟杆菌、梭菌等）。
5、选择性血平板 (如 Skirrow 培养基)
通过添加抗生素实现选择性分离，例如：Skirrow 培养基（分离 空肠弯曲菌）、CNA 血平板（抑制革兰阴性菌）。
三、溶血反应判定：血平板的核心鉴别价值
细菌产生溶血素对红细胞的破坏程度不同：
α-溶血（Alpha Hemolysis）
- 菌落周围草绿色晕环
- 血红蛋白氧化为高铁血红蛋白
- 代表：肺炎链球菌
β-溶血（Beta Hemolysis）
- 菌落周围透明清晰溶血环
- 红细胞完全裂解
- 代表：化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌
γ-溶血（Gamma Hemolysis）
- 菌落周围无溶血
- 代表：多数肠球菌
四、质量控制与保存管理：决定检测可信度的关键
血平板是“活性培养基”，必须严控：
1，加血温度控制（核心关键点）
- 灭菌后基础培养基必须冷却至 45–50℃ 再加入血液。
- 温度过高 → 红细胞破裂（变为巧克力背景）
- 温度过低 → 琼脂提前凝固
2，原料血保存
- 2–8℃ 冷藏避光
- 严禁冷冻
- 正常颜色应为鲜红色
- 若变为暗褐色或浑浊 → 不可使用
- 使用前轻柔摇匀，剧烈撞击也会导致红细胞机械性破损。
3，成品血平板保存
- 2–8℃ 倒置避光保存
- 使用前回温 30–60 分钟，冷平板会引发敏感菌的“冷休克”，导致检出率下降。
- 避免冷凝水滴落
4，颜色控制
- 优质的血平板鲜红色
- 颜色变暗、变紫，说明血液已被氧化
五、弃用标准：何时必须断舍离？
出现以下任一情况，应立即停止使用：
- 颜色由鲜红变为褐色
- 背景自发溶血
- 平板开裂或干缩
- 曾经冻融
- 质控菌不符合预期
结语
血平板看似基础，却是微生物学检测体系中最“敏感”的培养基之一。
从脱纤维工艺，到温度控制，再到功能验证，每一步都直接关系到溶血判读的准确性与报告结果的可信度。
真正高质量的血平板，不仅是一块培养基，更是一套严格执行的质量管理体系。
