中国药典1109通则 BCCSA选择性培养基解析：从BCA到BCSA的配方演化
发布时间：2026-08-20 浏览次数：21
从BCA到BCSA再到BCCSA，四代选择性培养基如何一步步演化？丙酮酸钠、磷酸缓冲体系、抑菌组合的优化背后，是怎样严谨的科学设计？本文聚焦中国药典2025年版通则1109"洋葱伯克霍尔德菌群检查法"的核心技术——BCC选择性培养基的研发历程、配方设计思路与适用性验证，揭示这把"火眼金睛"背后的科学故事。
一、BCC检查法的前世今生
1.1 国际法规演进
| 年份 | 里程碑事件 |
|---|---|
| 1985 | Gilligan等研发了第一代针对B. cepacia的选择性培养基PCA |
| 1987 | David等基于OF乳糖氧化发酵培养基，添加抗生素，形成OFPBL |
| 1997 | Henry等对OFPBL进行改良，添加蔗糖、酵母浸粉，调整抗生素种类及浓度，形成BCSA配方 |
| 2014 | 美国药典发布USP<60>征求意见稿 |
| 2019 | USP<60>正式收载Bcc检查法 |
| 2019 | 中国药典Bcc检查方法课题立项 |
| 2021 | 中国药典Bcc检查方法课题完成 |
| 2025 | 中国药典2025年版正式收载通则1109"洋葱伯克霍尔德菌群检查法" |
1.2 中国药典1109的方法概览
通则1109规定的BCC检查法包括以下关键步骤：
二、BCC选择性培养基的研发历程
2.1 第一代：PCA培养基（1985）
Gilligan等（1985）研制了针对B.c.选择性培养基PCA，其设计思路包括：
- 以麦芽糖和葡萄糖作为碳源
- 添加多黏菌素B（抑制革兰氏阴性杆菌非目标菌）
- 添加结晶紫（抑制革兰氏阳性球菌）
- 以酚红作为pH指示剂（Bcc产碱使培养基颜色由黄变粉）
局限性：回收率不够理想，部分Bcc菌株无法良好生长。
2.2 第二代：BCA培养基（Oxoid BCA）
在PCA基础上改良形成商业化的BCA培养基（Mast BCA / Oxoid BCA），被进出口检验检疫标准SN/T 4485-2016收录。
改良要点：调整碳源和氮源含量 - 通过pH缓冲剂降低培养基初始pH - 添加庆大霉素增强对非目标菌的抑制
2.3 第三代：BCSA培养基（1997）
Henry等（1997）进一步改良，形成了USP<60>和SN/T 4684-2016中收载的BCSA配方。
核心配方（USP<60>）：
- 胰蛋白胨：提供氮源和氨基酸
- 蔗糖：作为碳源（Bcc可利用蔗糖产碱）
- 酚红：pH指示剂
- 庆大霉素 10 mg/L
- 万古霉素 2.5 mg/L
- 多黏菌素B 600,000 U/Lorate
- 乳糖：作为第二碳源
存在问题：部分Bcc菌株回收率仍有提升空间 - 非Bcc菌株（如B. gladioli、R. pickettii、S. maltophilia等）可出现生长或弱生长 - 部分菌株产碱指示特征不够明显
2.4 第四代：BCCSA培养基（2022）——中国药典的选择
中国食品药品检定研究院余萌、王似锦、马仕洪等（2022）在现有BCA和BCSA的基础上，对配方进行了系统优化，形成了BCCSA选择性培养基，最终被中国药典2025年版通则1109收载。
Burkholderia_cepacia_selective_medium_fmicb-2025-1631983.pdf
三、BCCSA培养基的配方优化——科学背后的设计思路
3.1 碳源优化——为什么选择蔗糖+丙酮酸钠？
BCC可利用丰富的碳源种类。余萌等通过Omnilog碳源代谢分析发现：
- BCC不能利用的碳源（仅7种）：D-麦芽糖、D-纤维二糖、D-松二糖、α-D-乳糖、L-鼠李糖、肌苷、D-乳酸甲酯
- 所有Bcc成员均可利用丙酮酸钠（100%阳性利用率）✓
基于此发现，BCCSA在配方中：
- 保留蔗糖：Bcc可利用蔗糖产碱，使pH上升，与酚红指示剂配合产生颜色变化
- 新增丙酮酸钠：作为补充碳源，增强Bcc的生长速率，使其更快到达生长稳定期 ✓
- 去除乳糖：部分Bcc成员对乳糖利用不佳，去除后避免了对菌株生长的不必要限制
3.2 pH缓冲体系的优化
添加磷酸二氢钾作为pH缓冲剂：
- Bcc生长过程中产碱，导致pH上升
- 过高的pH可能抑制部分敏感菌株的生长
- 磷酸缓冲体系将pH维持在适宜范围（约6.2-也为后续的指示特性提供了稳定的颜色变化基线
3.3 抑菌体系优化——精准打击，不误伤目标
BCCSA保留了BCSA中的三种抗生素组合，但进行了浓度调整：
- 庆大霉素：主要抑制革兰氏阴性杆菌非目标菌（如肠杆菌科成员）
- 万古霉素：主要抑制革兰氏阳性球菌
- 多黏菌素B：主要抑制革兰氏阴性杆菌非目标菌
- 结晶紫：抑制革兰氏阳性球菌
非目标菌抑制效果（补充实验结果）：
| 非Bcc菌株 | BCSA | BCA | BCCSA |
|---|---|---|---|
| B. gladioli | + | + | + |
| R. pickettii | + | - | + |
| S. maltophilia | + | + | + |
| P. aeruginosa | - | - | - |
| E. coli | - | - | - |
| S. aureus | - | - | - |
注：B. gladioli、R. pickettii、S. maltophilia三种非Bcc菌株在三种培养基上均可出现生长或弱生长，这说明选择性培养基的筛选作用存在一定局限性，需配合有效鉴定方法进一步确认。——这一发现被写入药典1109的注意事项中。
3.4 指示特性优化——让Bcc"现身"
BCC产碱特性是其选择性培养的重要指示机理：
- Bcc在蔗糖代谢过程中产碱 → 使pH上升
- 酚红指示剂：培养基初始pH约6.2（偏酸，淡黄色）
- Bcc生长时产碱 → pH上升至约7.2-7.4 → 酚红由黄变粉/红色
BCCSA相对于BCSA的指示优势：
- 颜色变化更为明显
- 由黄→粉红的对比度更高
- 菌落周围的pH变化圈更清晰
这使得操作人员更容易从平板上直观地识别疑似Bcc菌落。
四、BCCSA vs BCA vs BCSA——关键性能对比
4.1 促生长能力——谁能让Bcc长得更好？
计数回收试验结果： BCCSA对BCC菌株的回收率优于BCA和BCSA。
生长曲线试验结果（B.CICC10857为例）：
- BCCSA：最快到达生长稳定期，迟滞期短
- BCSA：其次
- BCA：最慢
结论：BCCSA的促Bcc生长能力最优。
4.2 指示特性——谁能让Bcc"现形"得更明显？
菌落表型对比：
| 特性 | BCCSA | BCSA | BCA |
|---|---|---|---|
| 培养基颜色变化 | 最明显 | 中等 | 较不明显 |
| 菌落颜色对比度 | 高 | 中等 | 较低 |
| 菌落观察难度 | 低 | 中等 | 较高 |
结论：BCCSA的指示特性最优。
4.3 抑制能力——符合USP<60>要求
三种培养基均能满足USP<60>规定的抑制能力要求（以金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003和铜绿假单胞菌CMCC(B)10104作为试验菌株，各接种约10⁴ cfu，均无回收）。
五、BCCSA培养基实用要点
5.1 培养基组成
BCCSA选择性培养基配方（中国药典2025年版通则1109）：
| 组分 | 含量 |
|---|---|
| 胰蛋白胨 | 10.0 g |
| 蔗糖 | 2.0g |
| 酵母提取物 | 1.5g |
| 丙酮酸钠 | 7.0g |
| 氯化钠 | 5.0g |
| 酚红 | 20mg |
| 琼脂 | 14.0 g |
| 庆大霉素 | 10mg |
| 万古霉素 | 2.5mg |
| 多黏菌素B | 6000000U |
| 结晶紫 | 1mg |
| 磷酸二氢钾 | 1.54g |
| 纯化水 | 1000 mL |
pH值：6.2±0.2（25℃）
5.2 培养基适用性检查
通则1109规定，BCCSA应进行适用性检查，包括：
1，促生长能力检查：Bcc试验菌株应良好生长
- B. cepacia CMCC(B)23005
- B. cenocepacia CMCC(B)23006
- B. aenigmatica CMCC(B)23010
2，抑制能力检查：非Bcc菌株应被抑制
- S.aureus CMCC(B)26003
- P.aeruginosa CMCC(B)10104
3，指示特性检查：Bcc试验菌株应表现出典型的菌落形态和颜色特征
洋葱伯克霍尔德菌群Bcc的选择和分离培养基研究_余萌.pdf（推荐阅读）
5.3 培养时间和温度
培养温度：30-35℃
培养时间：24-72小时
注意事项：部分生长较慢的Bcc菌株可能需要延长培养时间至72小时
六、关键结论
1、BCCSA是经系统配方优化获得的Bcc选择性培养基，在促生长能力、指示特性、抑制能力三方面表现出最优综合性能。
2、丙酮酸钠的添加是BCCSA优于BCSA的独家优化亮点——充分利用了Bcc广泛碳源利用能力的生物学特性。
3、磷酸缓冲体系的引入确保了pH环境稳定，为指示特性提供了有利条件。
4、选择性培养基具有筛选作用局限：B. gladioli、R. pickettii、S. maltophilia等非Bcc菌株在三种培养基上均可出现生长或弱生长。检出疑似菌落后必须通过有效的鉴定方法进行确认。
5、BCCSA培养基已被正式收载入中国药典2025年版通则1109，作为中国官方Bcc检查法中的选择和分离用培养基。
参考文献
[1] 余萌, 王似锦, 曹蕊, 等. 洋葱伯克霍尔德菌群（Bcc）的选择和分离培养基研究[J]. 中国药事, 2022, 36(7): 746-757.
[2] 中国药典2025年版. 通则1109 洋葱伯克霍尔德菌群检查法[S].
[3] Henry D A, Campbell M E, LiPuma J J, et al. Identification of Burkholderia cepacia Isolates from Patients with Cystic Fibrosis and Use of A Simple New Selective Medium[J]. Journal of Clinical Microbiology, 1997, 35(3): 614-619.
[4] Gilligan P H, Gage P A, Bradshaw L M, et al. Isolation Medium for the Recovery of Pseudomonas cepacia from Respiratory Secretions of Patients with Cystic Fibrosis[J]. Journal of Clinical Microbiology, 1985, 22(1): 5-8.
[5] USP43-NF38 <60> Microbiological Examination of Nonsterile Products—Tests for Burkholderia cepacia Complex[S].
[6] Vermis K, Vandamme P A, Nelis H J. Burkholderia cepacia Complex Genomovars: Utilization of Carbon Sources, Susceptibility to Antimicrobial Agents and Growth on Selective Media[J]. Journal of Applied Microbiology, 2003, 95(6): 1191-1199.
