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产品名称：传染性皮下和造血组织坏死病毒（IHHNV）核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）
英文名称：PCR Detection Kit for Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus (Fluorescent Probe Assay)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
|---|---|
| FZ002AF2 | 48 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒适用于水产样本中传染性皮下和造血组织坏死病毒（IHHNV）的检测。
检测原理：基于实时荧光 PCR技术，针对IHHNV特异性基因设计引物和荧光探针并优化反应所需试剂组分，加入待检样品核酸即可进行扩增反应。在扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq酶分解并产生荧光信号，此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号，同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线，进而判定IHHNV是否检出。
传染性皮下和造血组织坏死病毒（IHHNV）核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）产品组分：
| 组分名称 | 规格×数量 |
|---|---|
| 裂解液 | 1 mL×2管 |
| 阳性对照 | 200 μL×1管 |
| 阴性对照 | 200 μL×1管 |
| 预混液 | 1 mL×1管 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件与保质期：-20℃储存，有效期为9个月，避免反复冻融。
灵敏度：最低检验限：10-100 Copies/Test
所需其他材料和适用仪器：荧光定量PCR仪（具有能够检测FAM标记的荧光通道）、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
传染性皮下和造血组织坏死病毒（IHHNV）核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）使用指南：
1，样品前处理：取50 mg左右（约黄豆粒大小）的组织样品（对虾鳃、胃及各期虾苗幼体）于玻璃匀浆器中匀浆，匀浆后置于1.5 mL离心管中。
2, DNA提取
1) 对上述处理好的样品加入50 μL裂解液，100℃恒温处理10分钟，13000 rpm离心5分钟，上清即含待检测样品DNA。如不立刻开展检测请将上清液转移至0.2 mL无菌离心管中，-20℃保存。
2) DNA的提取也可以采用商品化的水生动物病毒核酸提取试剂盒进行提取，请严格按照试剂盒说明书进行操作。
3, 加样、反应
1) 按照需求取n个PCR反应管（n=待检测样品数+1管阴性对照+1管阳性对照），从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋振荡后短暂离心，向以上每个PCR管中加入20 μL预混液。
2) 向上述n个反应管中分别按顺序加入阴性对照、待测样品DNA、阳性对照各5 μL，加样后立刻盖紧管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
3) PCR反应体系为25 μL，设置FAM检测通道读取，在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，具体程序如下：
| 反应阶段 | 温度 | 时间 | 信号收集 | 循环数 |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 30 sec | ✔ |
注：对于ABI系列荧光定量PCR仪器，其反应体系中无需添加ROX，且在软件设置时，在“Passive Reference”和“Quencher”处均选择“None”。
4, 结果：一般情况下，可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整，可根据所使用仪器的自身情况（如噪声等）以及选取的不同荧光通道进行调整。
1) 质量控制：阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值＞37，阳性对照出现S型扩增曲线且其Ct值＜30。若阴阳性对照未同时满足上述条件，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
2) 结果判读：
① 无Ct值，且未出现典型的S型扩增曲线，为阴性结果，判定为IHHNV未检出；
② Ct值≤37，且出现典型的S型扩增曲线，为阳性结果，判定为IHHNV检出；
③ Ct值＞37，且出现典型的S型扩增曲线，建议重新检测，若重检后Ct值≤37，且出现典型的S型扩增曲线，则判定为阳性结果，反之则为阴性结果。
注意事项：
1、实验环境条件和过程控制应参照GB/T 27403《实验室质量控制规范食品分子生物学检测》规定执行。
2、使用本试剂盒前请仔细阅读本说明书全文，检测过程中建议穿洁净工作服，戴一次性手套，使用的移液枪头需提前灭菌。
3、试剂盒中试剂使用前需充分融化、混匀，短暂离心后使用，期间需尽量避免产生气泡，加样完毕后检查反应管是否盖紧，避免泄露造成污染。
4、待检测样品基因变异可能会造成假阴性结果；待检测样品交叉污染、实验室环境污染以及试剂污染均会造成假阳性结果。
5、不同批号的产品请勿混合使用，请在产品有效期内使用试剂盒，由于操作不当引起的误判，以及由此误判引发的其他事项，本公司概不负责。
6、检测完毕后，根据相关规定正确处理废弃耗材以及扩增产物。
