产品名称：碳青霉烯类耐药菌核酸多重检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
英文名称：Multiplex PCR Detection Kit for Carbapenem-Resistant Pathogenic Organisms (Fluorescent Probe Assays)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
|---|---|
| FZ027BF2 | 48 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒仅适用于环境等样本中的碳青霉烯类耐药菌株的定性检测。实验结果仅供基础研究参考，不作为临床诊断依据。
检测原理：本试剂盒基于Real Time PCR技术，可同时检测三种碳青霉烯类耐药机制相关的β内酰胺酶（A类：肺炎克雷伯碳青霉烯酶；B类：新德里β内酰胺酶金属酶；D类：苯唑西林酶-48）基因。针对KPC、NDM-1以及OXA-48等三种耐药基因，只需往检测体系中加入待检样品核酸，即可进行扩增反应。在发生扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq酶分解并产生荧光信号，此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号，同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线，进而判定β内酰胺酶类型。
碳青霉烯类耐药菌核酸多重检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分：
| 组分名称 | 规格×数量 |
|---|---|
| 裂解液 | 1 mL×2管 |
| 阳性对照 | 200 μL×1管（暂无） |
| 阴性对照 | 200 μL×1管 |
| 预混液 | 1 mL×1管 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件与保质期：-20℃及以下避光储存，有效期为12个月，避免反复冻融。冷冻条件下运输。
灵敏度：单通道最低检验限达到10~500 cfu/Test。
所需其他材料和适用仪器：荧光定量PCR仪（具有能够检测FAM、VIC、Cy5标记的荧光通道）、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
碳青霉烯类耐药菌核酸多重检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用指南：
1，样品前处理：使用 1 μL 接种环刮取分离新鲜培养 18 h~24 h 的待鉴定的可疑菌落，悬浮到含 30 μL 裂解液或者无菌水的0.2 mL无菌离心管中，充分悬浮菌体，轻弹管壁消除气泡，99℃加热 10 min； 12000 r/min 离心 15 min，上清即为粗提的DNA，可转移至 0.2 mL 无菌离心管中，在-20℃下可长期保存。也可以选择商业化的细菌基因组提取试剂盒进行提取。
2, 加样、反应
1) 按照需求取n个PCR反应管（n=1管阴性对照+待检测样品数+1管阳性对照），从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋后短暂离心，以上每管加入20 μL预混液，待用。
2) 向上述n个反应管中分别加入阴性对照、待测样品DNA、阳性对照各5 μL，总反应体积为25 μL。盖紧管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
3) PCR反应体系为25 μL，取FAM、VIC、Cy5检测通道，在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，具体程序如下：
注：在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，对于多通道荧光PCR仪，取荧光素 “FAM”、“VIC”、“Cy5”为信号采集通道，淬灭基团选择“None”，染料校正选择“None”。
3, 结果：一般情况下，可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整，可根据所使用仪器的自身情况（如噪声等）以及选取的不同荧光通道进行调整。
1) 质量控制：阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值＞37，阳性对照（试用装暂未提供）出现S型扩增曲线且其Ct值＜25。若阴阳性对照不同时满足上述条件，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
2) 结果判读：（根据反应所得Ct值判读，具体见下表：）
各致病型阳性判别标准：
❖ 多重qPCR检测可能出现不同荧光通道之间竞争抑制的问题，单基因分析时适当调整阈值线。
注意事项：
1、实验环境条件和过程控制应参照GB/T 27403《实验室质量控制规范食品分子生物学检测》规定执行。
2、使用本试剂盒前请仔细阅读本说明书全文，检测过程中建议穿洁净工作服，戴一次性手套，使用的移液枪头需提前灭菌。
3、试剂盒中试剂使用前需充分融化、混匀，短暂离心后使用，期间需尽量避免产生气泡，加样完毕后检查反应管是否盖紧，避免泄露造成污染。
4、待检测样品基因变异可能会造成假阴性结果；待检测样品交叉污染、实验室环境污染以及试剂污染均会造成假阳性结果。
5、不同批号的产品请勿混合使用，请在产品有效期内使用试剂盒，由于操作不当引起的误判，以及由此误判引发的其他事项，本公司概不负责。
6、检测完毕后，根据相关规定正确处理废弃耗材以及扩增产物。
