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食品微生物检验GB4789.2-2016菌落总数测定及注意事项
发布时间：2020-08-28 浏览次数：21609 分享：
一、菌落总数定义和卫生学意义
•菌落总数定义：指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的菌落数
•卫生学意义：菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、GB4789.2-2016菌落总数测定（平板法）
1. 菌落总数检验流程图
2. 结果计数
•可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。
•选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
•其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。
•当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长势，则将每条单链作为一个菌落计数。
3. 结果计算
•若只有一个稀释度平板上的菌落数在30~300CFU之间,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL)样品中菌落总数结果。
•若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
•若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
•若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
•若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于300CFU时,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
•若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:
4. 结果报告
•菌落数小于100CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。
•菌落数大于或等于100CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
•若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。
•若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
•称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以•CFU/mL为单位报告。
•注：菌落总数结果计算与报告方式实例见以下表格
编号 | 稀释倍数及菌落数 | |||||||
10-1 | 10-2 | 10-3 | 菌落总数 | 报告方式 | ||||
平皿1 | 平皿2 | 平皿1 | 平皿2 | 平皿1 | 平皿2 | （CFU/g或ml） | （CFU/g或ml） | |
1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | ﹤1×10 | ﹤10 |
2 | 24 | 26 | 5 | 7 | 0 | 0 | 250 | 250或2.5×102 |
3 | 多不可计 | 多不可计 | 150 | 160 | 15 | 20 | 15500 | 16000或1.6×104 |
4 | 多不可计 | 多不可计 | 236 | 245 | 35 | 33 | 24955 | 25000或2.5×104 |
5 | 多不可计 | 多不可计 | 236 | 245 | 25 | 33 | 24476 | 24000或2.4×104 |
6 | 多不可计 | 多不可计 | 多不可计 | 多不可计 | 320 | 330 | 325000 | 330000或3.3×105 |
7 | 多不可计 | 多不可计 | 310 | 320 | 28 | 26 | 27000 | 27000或2.7×104 |
8 | 多不可计 | 多不可计 | 295 | 325 | 22 | 20 | 29500 | 30000或3.0×104 |
9 | 菌落蔓延 | 菌落蔓延 | 菌落蔓延 | 菌落蔓延 | 菌落蔓延 | 菌落蔓延 | 菌落蔓延 | 菌落蔓延 |
1. 质量控制
•实验室过程中，每批样品稀释液都要做空白对照。
•为了控制环境污染，每次检验过程中，于检验台上打开两块计数琼脂平板，并在检验环境中暴露不少于15分钟，将此平板与本批次样品同时进行培养，以掌握检验过程中是否存在来自检验环境的污染。
•定期使用大肠埃希氏菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC6538和枯草芽孢杆菌ATCC6633或相应定量活菌参考品，在P2实验室或阳性对照实验室内，用适当的食品样品进行阳性实验验证，并进行记录，次验证实验至少每2个月进行1次。
Q-Strain定量质控菌株
2.疑难解析
1：为什么水产品与其他食品中菌落总数检测时所采用的培养条件不同？
水产品产自海水或淡水，其温度较低，因而在制定水产品的食品安全检验时选择了30±１℃进行培养，培养时间为72 ±3h。
2：当高稀释度平板上的菌落数反而比低稀释度平板上菌落数高时，如何处理？
首先结果不能直接记录报告。应针对此结果进行原因分析，并对剩余样品进行重复实验，如确认结果如此，则表示样品中可能有影响菌落计数结果的抑菌物质，应使用稀释、中和剂、过滤等方式去除样品中的抑菌物质再进行检测、报告。
3：当所有平板上都菌落密布时，结果如何报告？
不应报告多不可计，应在稀释度最高的两个平板上，分别任意取2cm2,计数其中的菌落数，计算每2cm2的平均菌落数，乘以平皿面积（如平皿直径为90mm,则乘以平皿面积63.6cm2），再乘以稀释倍数报告。
四、菌落总数测试片法
1. 原理：由轻便防水纸质材料做支撑，其上覆盖干燥培养基层（营养物质、凝固剂、选择抑制剂、显色剂）和透明隔水膜组成，经辐照灭菌。菌落总数检测片可用于食品、饮料等菌落总数计数，含有四氮唑指示剂菌落为红色。
2. 特点优势：
•菌落计数特别方便（容易判读），红色菌落，易于食品颗粒分开，无菌落重叠现象；
•菌落分布特别均匀；
•避免了培养基对细菌热损伤有关；
•菌落蔓延或半透明菌膜现象很少发生
•经济环保 无粉尘，体积小，重量轻，易储运 保质期长干制无水培养基，性质稳定，保质期更长
3. 操作注意事项
•接种时避免气泡产生。
•将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片数不超过20片。
五、所需培养基试剂和质控菌株
用途 | 货号 | 名称 | 规格 |
样品稀释 | CP0630 | 生理盐水 | 盒（袋装）225 mL×10袋 |
CP0511A | 磷酸盐缓冲液（PBS） | 盒（瓶装）225 mL×6瓶 | |
CP0640 | 磷酸盐缓冲液（PBS） | 盒（袋装）225 mL×10袋 | |
022117 | 磷酸盐缓冲液（PBS） | 瓶（干粉）250 g | |
CP0310 | 生理盐水 | 盒（管装）9 mL×20支 | |
平板计数 | 022070 | 平板计数琼脂（PCA） | 瓶（干粉）250 g |
CP0830 | 平板计数琼脂平板（PCA） | 盒（平板）90 mm×20 | |
022070P1 | 平板计数琼脂(PCA) | 瓶（颗粒）250 g | |
HANDYPLATE微生物测试片 | HP001 | 菌落总数测试片 | 20片/包 |
Q-Strain定量质控菌株 | QS011A | 大肠埃希氏菌（ATCC25922） | 110-1100 CFU/瓶 |
QS011B | 大肠埃希氏菌（ATCC25922） | (0.6-2.0)×107 CFU/瓶 | |
QS008A | 金黄色葡萄球菌（ATCC6538） | 110-1100 CFU/瓶 | |
QS008B | 金黄色葡萄球菌（ATCC6538） | (0.6-2.0)×107 CFU/瓶 | |
QS004A | 枯草芽孢杆菌（CMCC(B) 63501） | 110-1100 CFU/瓶 | |
QS004B | 枯草芽孢杆菌（CMCC(B) 63501） | (0.6-2.0)×107 CFU/瓶 |
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