洁净环境监测用无菌平板培养基适用性检查注意事项
发布时间：2022-11-28 浏览次数：5192
洁净环境监测用无菌平板培养基属于商品化的预制培养基。在2020版中国药典<9203>药品微生物实验室质量管理指导原则中明确了 “微生物实验室使用的培养基可直接采用商品化的预制培养基。”
目前洁净环境监测用培养基主要是胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA），该培养基为可满足广泛微生物生长的广谱性培养基，此外还可用适合霉菌酵母生长用的沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。
为保证洁净环境监测用培养基质量符合洁净环境空气及表面微生物检测的使用要求，使用前应进行适用性技术性验收。那么这类培养基的适用性检查该怎么做？有法可依吗？有的！！
2020版中国药典<9203>关于环境监控培养基的质量控制指导说明 “用于环境监控的培养基须特别防护，以防止外来污染物的影响及避免出现假阳性结果。”简单的说就是环境监控的培养基应无菌。另外，由于该类培养基的主要作用是将洁净环境中我们肉眼看不见的微生物培育呈我们肉眼可见的菌落，通过菌落数评估环境微生物污染情况，也就是微生物计数，因此，从这类培养基质量评价还需考虑对微生物促生长的能力。
总的来说，洁净环境监测用无菌平板培养基应符合培养基的无菌性检查及促生长灵敏度检查的要求。
1、洁净环境监测用无菌平板培养基的无菌性检查
从每批无菌平板培养基中随机抽取包装完整的若干包（具体根据采购数量确定），将包装完整的预灌装TSA置于30-35℃温度培养5天，包装完整的预灌装SDA置于20-25℃温度培养7天，应无菌生长。
操作注意：
1）由于环凯提供的三层包无菌平板培养基采用的是非真空包装形式，包装内不缺氧气，因此，无菌检查培养无需拆包，完整包装状态培养不影响污染微生物的生长，结果直接客观评价培养基的无菌性。
2）非真空包装设计的无菌平板培养基，在2℃-25℃储存期间相当于100%低温预培养，进一步保证培养基的无菌性。
2、洁净环境监测用无菌平板培养基的促生长灵敏度检查
由于洁净环境监测用无菌平板培养基的用途也是需氧兼性厌氧细菌霉菌酵母等微生物计数，因此，此类培养基的促生长灵敏度检查，可参考《中国药典》2020版四部“1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”规定，培养基适用性以回收率和菌落形态作为判定标准（详见表1 ）
操作注意：
1）试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
2）接种测试培养基的测试菌量为不大于100CFU/皿，按药典菌液制备方法，需把控好适宜浓度的选择；也可选择商品化定量菌种替代传统方法的菌液制备。
3）涂布接种时需注意，如采用火焰灼烧灭菌的涂布棒，涂布前需冷却至室温再涂布；涂布时可顺时针、逆时针在培养基表面打圈涂布若干圈，使菌液均匀涂布在培养基表面，菌液被培养基基本吸干即停止涂布。涂布圈数根据培养基对菌液吸收程度确定。
4）如菌液被培养基吸干还继续涂布，对个别微生物（如，大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌）其菌体细胞会造成机械损伤，导致回收率下降。
90mm平皿培养涂布接种操作介绍
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