食品表面及加工环境表面取样宝典
发布时间：2025-06-11 浏览次数：259
文章来源：六扇门公众号
小六之前有介绍过环境取样经常采用的3个方法，接触碟法（Contact plate method），采样棉签/采样棒（Stick swab method），采样海绵（Sponge/cloth method）等。具体这3种方法有哪些具体要求，本期我们看看国际标准中怎么要求？方法怎么使用？看看选择这些采样产品需要重视的性能参数有哪些？
国际上可参考的标准及关键内容
ISO 18593 — Food chain surface sampling Methods
1.接触碟法（Contact plate method）
只适用于平面采样，不要使用接触板法进行定性检测的取样。
操作方法：牢固地按压接触板的琼脂表面，对试验表面没有任何横向移动。按压时间大约10s，取样后立即关闭接触板，并将其放回运输容器中。
2.棉签/采样棒（Stick swab method）
适用表面：难以触及≤100 cm²的小区域（例如空心滚轮或电机外壳内）
建议使用无菌一次性采样棒，避免污染；对材料有要求，不能使用具有一定残留的棉签，表面取样后很容易污染内部。特别适用于环境微生物的定量检测取样，如指示菌。
操作方法：应使用涂抹棒采集取难以触及到的小面积位置（如空心滚轮或电机外壳内部）。建议使用一次性无菌采样棒。
✨如果取样区域是湿的，可以使用干棉签/涂抹棒，需要中剂情况除外。
✨如果取样区域干燥，应使用湿的棉签/涂抹棒。
✨为了提高微生物的回收率，最好使用预制有一定稀释液的涂抹棒。
3.采样海绵（Sponge/cloth method）
适用表面：大表面积> 100 cm²（例如，传送带，地板），如：致病菌定性检测（1000 ~ 3000 cm²，美国FSIS 30 X 30 cm²）和不规则区域（如地板狭窄裂缝）。
✨如果取样区域是湿的，可以使用干海绵/布，需要中剂情况除外。
✨如果要取样的区域是干燥的，使用湿润的海绵/布。
✨为了增加微生物的回收率，最好使用湿润的海绵/布。
ISO 17604— Carcass Sampling Methods
1.胴体切割
1）模具切割法
采样范围：表面精密采样（如肌肉/脂肪界面）
工具：模具（例如：100 cm²）+手术刀
2）钻子切割法
采样范围：深层组织取样（如肌肉内污染）
工具：无菌取心器（直径5 ~ 10 mm）
2.海绵取样方法
采样范围：用于较大区域的表面取样，无损/快速/更适用于冷冻胴体。
工具：无菌木轴棉签或海绵、卫生棉签、模具（可选）。
操作步骤：
✨干海绵取样：用10 mL稀释液润湿棉签，在模板内横竖涂抹各10下，再次使用干拭子取样。
✨预湿海绵取样在模板内横竖涂抹各10下。
3. 淋洗取样法
采样范围：家禽和小型哺乳动物
操作步骤：用无菌稀释液(400 mL~ 600 mL稀释剂)冲洗胴体，覆盖整个胴体。
ISO 18593 和 ISO 17604 对"采样后，运输和保存”的要求
1. 接触碟
采样和测试之间的延迟应尽可能短。
取样后，将样品放入1 °C～8 °C的保温运输容器中，以一种不发生污染的方式，然后以1°C～8°C下运输。
样品应在取样后的48小时内进行培养。 或者，样品可以在运输容器中运输，以保持一致的温度，这样就不会发生污染。样品应从采样到采样48小时内完成培养，考虑到从采样到培养的时间，如果适当的话，可作为培养时间的一部分。
2. 采样棉签/采样棒和采样海绵
采样和测试之间的间隔应尽可能短。 样品在放入绝缘运输容器之前最好要冷却，并在1°C～8°C下进行运输。 样品最好在取样后24小时内进行检测。 如果在实验室收到样品后延迟检测，样品应保存在3 °C ± 2 °C中，最多不超过48小时 。
选择采样产品需要考虑的技术参数有哪些？
1. 采样效果如何，尤其是生物膜的采集效果？
✨采样棒/海绵需要适应沟槽、裂缝、凸起等不平整表面，增大接触面积，有效刮擦和吸附附着在这些复杂结构上的生物膜。
✨能够吸附和截留大量的液状基质（生物膜的主要组成部分）和脱离的生物膜碎片/微生物细胞。同时，材料的耐磨性也很重要，保证在擦拭时不掉渣或过度撕裂。
2. 中和液的中和效果如何？
✨Letheen肉汤，对碘、季镀盐和氯消毒剂具有中和能力。但是它没有能力中和汞、甲醛或戊二醛的能力。Letheen 肉汤具有一定的增菌能力，因此样品采集后应对其表面重新进行消毒处理。
✨D/E 中和缓冲液，可中和广谱的消毒剂和防腐剂。并且具有增菌能力，所以样品采集后必须对表面进行再消毒处理。
✨NB中和缓冲液，对含氯/碘制剂及过氧化物的消毒剂有一定中和效果，它不能有效地中和酚类汞类、甲醛或戊二醛类消毒剂，不含增菌效果，因此在样品采集后不需要对采样点进行重新消毒。但是该配方含有芳基磺酸盐复合物，如果采用分子检验方法，需要注意避开。
✨BPW缓冲液，具有增菌和易损伤菌的修复作用，中和消毒剂的能力最小，通常用于屠宰场环境采用，同样，采样后应重新对其表面进行消毒处理。
✨无菌生理盐水，其渗透压基本与菌的细胞液相当，可以起到缓冲保护作用。
✨磷酸盐缓冲液，除了对菌有保护作用，还可以调节pH。
3.采样后，对现有环境是否有残留？是否与后续检测方法的兼容？
采样工具建议不含以下成分，以减少残留对环境对污染。
✨某些残留（如塑化剂、重金属）可能迁移到食物中，构成食品安全风险（需符合食品接触材料法规）。
✨已知的过敏源成分，减少过敏物源的影响；
✨已知的PCR抑制剂，需要考虑与检测方法的兼容性；
✨动物源性物料，减少动物源物料的担忧；
✨ATP生物荧光，需要考虑与ATP检测的联合应用。
