“倒平板”技巧
发布时间：2025-07-29 浏览次数：22
这篇文章前几天发过一次，有友友说我写的不全，再加上友友们的问题和实验室小伙伴的问题，我又总结扩充了一下内容，希望大家这次学习完后，真正掌握操作技巧，再也不会有“倒平板”烦恼。
一、确定培养基温度
1.原理：手背比手心对温度敏感。
插入个笑话：手心手背都是肉，但温度确实不一样。大家慢慢细品。
证据：怀疑是否感冒发烧，是不是用手背测温？大家慢慢细品。
2.温度确定
(1) 教材上说，固体培养基倾注的温度在45℃-50℃，怎么确定？
技巧：用手心轻轻碰一下盛固体培养基的三角瓶，感觉不烫，然后用手背也感觉一下，感觉烫手，这时的温度大概是50℃。（口诀：手心不烫手背烫）
(2)为什么要确定培养基温度？
温度过高，培养基凝固时间过长，培养皿皿盖上会出现大量冷凝水，不利于后续实验。比如说，冷凝水影响平皿中菌层分布，影响抑菌圈的准确性。
对于需要添加不耐热的抗生素等试剂的培养基，温度过高，试剂容易失效。
琼脂粉凝固温度在40℃左右，因此固体培养基40℃左右开始凝固结块，倒出来的平板凹凸不平，既不美观也不好使。
(3)平板凹凸不平能不能使用？
我个人不建议使用，试验本就枯燥乏味，看着凹凸不平，心情也好不到哪里。不过新手应该没感觉，没尝试过平平整整嘛。
如果发现培养基开始凝固，怎么办？
不要倒平板！不要倒平板！不要倒平板！封口后，用微波炉或电磁炉等加热工具重新加热，溶解后重新冷却至45℃-50℃倒平板。
二、防止水蒸气形成
1.原理：汽化到液化的物理现象。
看看这个锅盖，是不是跟培养皿盖一样，唯一不同的是，这里的水沸腾，水蒸发的比较快而已。
2.预防措施
基于上述原理，第一个措施就是待固体培养基降低温度至45℃-50℃，开始倒平板，此时水蒸气蒸发速度减慢，皿盖产生的水就少。采用上述方法，判断培养基温度，待其温度至45℃-50℃，开始倒平板，如果还有水气，37度倒置空培即可。
第二个措施：即使温度至45℃-50℃，培养皿盖还是有水蒸气、还是会有水珠，怎么办？倒平板的时候把皿盖打开，待全部倒完后，超净台里凝固5min后，关闭皿盖，倒置放置，备用。
第三个措施：跟上面一样，也是把皿盖打开，该法是完全打开，待凝固后关闭皿盖，经常见实验室小伙伴们这样做，效果也挺好。当然这两种方法都不是很严谨的方法，但真的很好使。
第四个措施：传统又常规的方法。根据水蒸气原理，在倒培养基时，可以一个垒一个，静置直到全部培养皿凝固，倒置备用。这种方法，除了最上面的皿盖有水蒸气，其余皿盖都不会有水蒸气产生。如果最上面平板倒好后，将热水三角瓶或热水平皿放上面，那也不会有水蒸气。
三、预防培养基气泡形成
1.原因：气泡形成原因比较多，比如说培养基中蛋白成分比较高，这一点没办法，但也不是固体培养基气泡形成的主要因素。主要原因还是培养基摇匀过程中出现的气泡。
2.预防措施
(1)灭菌之前，琼脂粉没有溶解。
这种情况，灭菌完成后，琼脂粉分布不均匀，需要摇匀，第一种温度较高时候摇匀，产生气泡也无需担心，温度高气泡上升会自动消泡，但太烫，比较危险⚠️；第二种待温度降至50-60℃，轻轻沿壁摇匀，让培养基整体沿着同一个方向摇起来，直到摇匀为止。
(2)灭菌之后，需要添加抗生素等试剂
温度降至45-50℃，再加入抗生素等试剂，轻轻沿壁摇匀，让培养基整体沿着同一个方向摇起来，直到摇匀为止。
(3)已经产生好多气泡，又消不掉
用微波炉等加热设备重新加热一下，温度高了气泡也就从培养基中跑出来啦。
四、确定培养基厚度
很多友友不知道如何把握培养基厚度，一个厚的顶盖一个薄的无法使用，以90mm培养皿为例，直径90mm、内高度约14-15mm（没有详细测量），可以盛放100mL水（实际测量）。
倒平板的时候大概20-25mL，20mL对应高度约3mm，25mL对应高度约4mm。所以，可以根据高度大概确定培养基厚度。这是第一个方法。
倒平板的时候，铺满整个培养皿底部，稍微再倒一点点就是20mL，再稍微多倒一点点就是25mL，这个需要经验，多倒几次就能把握。这是第二个方法。
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