医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法
发布时间：2025-08-04 浏览次数：90
第一次接触国标的时候，感觉很高大，不知为何物，为了照顾刚入行的新朋友，我们先简单了解一下国标相关信息。
“GB”是中华人民共和国国家标准的代号，其含义是“国标（guo biao）”两个字汉语拼音的第一个字母“G”和“B”的组合。我们国家标准代号分为 GB和GB/T。强制标准冠以“GB”。推荐标准冠以“GB/T”。T就是“推荐（tui jian）”的首字母。
这一节我们以GB/T16294-2010为基础，一起学习一下洁净室沉降菌的详细测试方法。
GB/T16294-2010是现行的标准，自20100902发布、20110201实施以来一直至今。因此，查看国标，要参照现行标准而不是废止标准。
新的标准又在起草中，在不久的将来，新国标将实施，各位朋友可以随时关注，知识也要更新换代，与时俱进。
一、GB/T16294-2010解读
1 适用范围
本标准规定了医药工业洁净室和洁净区等的沉降菌测试和环境的验证。实际上，无论是不是洁净区，我们想了解某环境中污染程度，都可以参照本标准。
3.1 沉降菌
沉降菌，即我们要检测的目标菌，也就是活微生物粒子。因通过自动沉降到培养皿的方式收集，所以叫沉降菌。
3.2 沉降菌菌落数
采用沉降测试方法，目的就是要确认洁净间的洁净级别，那我们就需要进行菌落计数。只不过，这里的计数和我们前面的计数不一样，这里是按每个培养皿中菌落数，前面是每g或mL中菌落数。
我们肉眼看不见空气中的微生物粒子，采用沉降法，在规定的时间内，让空气中的微生物自动降落到培养皿中，然后在恒温培养箱中培养直到出现肉眼可见的菌落，用微生物的菌落数来评定洁净室的洁净度。微生物数越少，说明洁净度越高。
洁净室的测试需要专业人员，但要想了解我们平常实验室的洁净室，我们有一定的卫生知识和丰富的微生物知识，完全可以自己做洁净室的测试，但必须严格按照本标准执行。
为了测试的准确性，所使用物品必需提前严格消毒。然后严格按照本标准规定，将培养皿放置到合适的位置。进行沉降菌测试，必须设立空白对照组。
TSA培养基适用于多种微生物的培养，SDA适用于真菌的培养。
静态测试和动态测试所需条件有所不同，不能混淆。
菌落计数按照每皿中菌落数计算。当然，提前是，空白对照没问题的情况下，本次试验数据可以作为参考，如果空白对照污染，本次试验作废，重新做沉降菌试验。
二、洁净室沉降菌的详细测试方法
1.制备固体培养基：
培养基可以参照国标中大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)或沙氏培养基(SDA)，也可以使用营养琼脂培养基。
可以选用90mm×15mm高硼硅酸玻璃培养皿也可以选用一次性培养皿。
2.布置固体平板位置：
平板放置位置可以参照GB16292-2010中位置布置，可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。
值得注意的是，要将平板放置在洁净室内的气流相对稳定区域。
工作区采样点位置离地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。
在符合布置点的同时培养皿的个数也要符合要求。
3.沉降采样
(1)放置平皿：在布置好的位置上放置平皿，每个位置放置至少两个平板，一个实验组，一个空白对照，标记。
(2)打开盖子采样：从里到外逐个打开平板盖，使平板表面暴露在空气中。对照组不需要打开盖子。使固体培养基表面暴露在空气中一定时间（一般为30min），使空气中的微生物沉降到培养基表面上。
(3)合上盖子：微生物沉降时间到，合上实验组平皿盖。
(4)培养：将实验组和对照组平皿放置于恒温恒湿培养箱中倒置培养。
4.计数统计
培养结束后，观察菌落直接计数统计。
5.评估洁净室洁净度
一般来说，洁净室的等级数字越小，说明洁净室的洁净等级越高，污染程度越低。
三、操作技巧和注意事项
1.测试过程中所有仪器试剂都要进行严格灭菌，以确保测试的可靠性、正确性。
2.为防止平板污染，影响实验结果，可以提前两天制作固体平板，空培养两天。
3.测试前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
4.采样时尽量减少人员流动。
5.每个采样点至少放置三个平皿，且要放置空白对照组。
6.计数要仔细辨别，计算所有菌落，若菌落重叠，只要能区分清楚，就按照单个菌落计数。
7.试验过程中，要做好记录，包括但不限于温度、湿度、人员流动、培养及成分等。
8.菌落计数按照每皿中菌落数计算。当然，提前是，空白对照没问题的情况下，本次试验数据可以作为参考，如果空白对照污染，本次试验作废，重新做沉降菌试验。
注：知识源于GB/T16294-2010，GB/T16292-2010，请详细阅读。知识有限，难免有知识盲区，如有问题，请留言，一起加油！！！
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